方法开发工程师。最近有没有受重托,在一周之内给委托部门提供一个可以直接在现场重复的色谱方法。新手们和老师傅们是不是压力都很大呢?
首先给您推荐一本可快速上手的方法开发指南,助您快速晋升为老师傅
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获得“Agilent-液相色谱手册——液相色谱柱与方法开发指南”。
老师傅也会有压力感?
接下来我们为您分解下压力。帮您各个击破!
压力(一)
委托您开发方法的实验室,使用的仪器来自不同的仪器厂家。
有的在使用高效快速的 UHPLC 有的还在使用传统 HPLC。
有的使用四元泵,有的使用二元泵。
不同的仪器运行相同的梯度条件,可能产生不同的分离效果。
压力(二)
样品中化合物含有可电离基团,缓冲体系流动相可以改善分离和峰形。但是优化缓冲体系流动相pH和浓度的操作费时费力。
压力(三)
不同色谱柱对化合物具有不同的选择性,
有时流动相优化很难改善分离时,通过更换色谱柱可以达到事半功倍的效果。
但是结果难以预测,需要手动更换色谱柱,捆绑了方法开发人员的时间和空间。
方法开发三件套
帮您排忧解难
色谱柱/流动相切换阀——自动切换色谱柱/流动相
通过阀连接多根色谱柱/流动相,阀位、色谱柱/流动相和采集方法一一对应,从而切柱子/流动相无需手动进行,而是在序列中自动完成。
全梯度范围混合四元泵技术——缓冲体系在线混合
水和有机相外,另外两路分别放置缓冲对浓溶液。通过调节缓冲对两路的总比例,调节缓冲溶液浓度;通过调节缓冲对两路的比例,调节缓冲溶液pH值。
为什么需要全梯度范围四元泵呢?因为缓冲对两路的比例常常会到 5% 甚至更低水平,这样的比例对于常规四元泵不可完成的挑战。但是配有安捷伦Inlet Weaver技术的全能泵(1290Infinity II 全能泵、1260 Infinity II Prime 全能泵)可以轻松应对 1-99% 全范围混合。
图为阿莫西林及杂质分离情况谱图(放大)黑色pH=2.1,蓝色pH=2.6,红色pH=3.1
图为不同 pH 条件下四元泵梯度时间表设置(A水, B乙腈, C 100mM H3PO4, D 100mM NaH2PO4)
智能模拟技术——无风险转移
1290 Infinity II 系列以及 1260 InfinityII Prime 搭载了智能模拟技术,使其可以模拟安捷伦其他型号仪器,以及其他厂商特定型号仪器。
当您在超高效色谱柱上,搭配上述工具开发完方法以后,您可以把 iSet 功能打开,选择该方法需要转移至的仪器型号,检验方法在被转移型号上的运行效果。也可以在整个方法开发过程中打开 iSet 功能,进行对应仪器型号的模拟。
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