实验结果发生严重误差,当我们发现竟然是因为整整占用了三分之二分析时间的样品前处理出现了失误,正值元宵佳节,相信很多战斗在一线的实验员们都会 “开始怀疑人生”了。以补充氨基酸标准品的样品前处理为例,氨基酸检测样品前处理应用最广泛的方法是酸水法,这是因为此法可以蒸发除去盐酸,水解彻底,产物单一,无消旋现象,然而症结在于某些补充氨基酸标准品在 HCl 中易发生降解,下文为你揭秘,这究竟是为什么。
补充氨基酸标准品在HCl 中易发生降解,原因几何?
某些补充氨基酸标准品在 HCl 中易发生降解,特别是谷氨酰胺和天冬酰胺,正因为如此,所以通常使用去离子水进行配制,也就是说标准配制方法不同。正确做法是将补充氨基酸溶解于去离子水中,如果将它们与其他氨基酸混合使用,则需要注意它们溶解于稀盐酸中,因此需要快速使用。
此外,还注意到其他氨基酸将在酸水解条件下发生降解。其中包括色氨酸和 4-羟基脯氨酸。然而,它们的降解机理不同。
请注意两种氨基酸中的酰胺基团。当这些基团暴露在酸中时,将水解释放出氨。
那么机理的来源究竟是什么呢?
由于质子 H+ 首先进攻酰胺的羰基氧 O 开始,然后经过水合以及脱氨 NH3 ,完成整个水解过程。经过水解,原本的酰胺变成羧酸和游离的氨。
总之,分析的症结就是在于补充氨基酸不稳定容易在酸中水解,如果您正在从事相关的实验,一定要注意样品前处理不要犯错哦。
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有关氨基酸分析的系列讨论到此结束。接下来我们将讨论肽谱分析。下次再会!
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