生物色谱柱讲堂 | 关于氨基酸分析的窍门与技巧（一）

还记得很久之前的色谱小讲堂吗？新的一年，我们带来了全新的生物色谱柱讲堂。从本周起，我们每两周便会推出一篇关于生物色谱柱的小贴士。在这里，我们将讨论并分享实用技巧，包括有助于节省时间、避免棘手问题的细节，以及发现和解决偶发性问题的方法。

第一讲 关于氨基酸分析的窍门与技巧

安捷伦的 AdvanceBio 氨基酸分析试剂盒使用指南提供了使用试剂盒所需的全部说明，但是为了使它应用在液相色谱中获得最佳性能，我们可以做些什么？例如，多久需要更换一次流动相？没人愿意数据受到影响或由于流动相改变而必须重新运行样品，但是不是总有这样的念头冒出来：“今天真的要更换流动相吗？还是多用一天好了…”

为了减少这种纠结，我们给出了以下的建议（包含更换频率）：

•  衍生化试剂（OPA 和 FMOC）、硼酸盐缓冲液和氨基酸标准品每天更换。FMOC 和 OPA 试剂尤其容易变质，因此应将每个安瓿的内容物转移至带有内插管的样品瓶中并冷藏。打开安瓿后，FMOC 和 OPA 最多能够使用 5 天；

• 至少每周配制一次新的流动相，对水相流动相而言更是如此。请牢记水相流动相在长期静置时可能发生的情况。在肉眼可见之前，流动相中已经有大量微生物；

• 至少每周重新校准一次保留时间和响应因子，只需在工作列表中加入氨基酸标准品即可；

• 选择一些指标以密切关注保护柱和分析柱的性能。例如，在日常校准运行中追踪系统反压和几对氨基酸之间的分离度，以确保快速发现色谱柱性能的任何下降或系统的其它问题。

虽然我们在讨论如何帮助您最大程度延长正常运行时间的预防性措施，但同样建议您避免自动进样器过度磨损。在线衍生程序中需要包含几个允许自动进样器进行试剂混合的步骤。操作指南规定以默认速度进行混合。不要尝试将混合速度提高到最大值！或者，在旧款液相色谱仪上运行的方法现要在新款仪器上运行，则该方法不应再使用最大混合速度。新款自动进样器的最大混合速度比旧款自动进样器快得多，频繁使用最大速度可能使自动进样器的部件过早磨损。请坚持使用默认混合速度并妥善使用自动进样器。

最后，关于色谱柱存放的几点建议：

• 避免用流动相 A 液体保存色谱柱，即使只是过夜放置也不建议；

• 短期存放（包括过夜）时，使用流动相 B 液体保存色谱柱；

• 长期储存时，使用 50% 乙腈水溶液保存色谱柱。

相对于非常容易在碱性条件下发生溶解的传统硅胶柱，这里适用的色谱柱是经过改性可耐受碱性条件的 Adv.Bio AAA 色谱柱。因此 Adv.Bio AAA 色谱柱能够在 pH 8.2 的流动相中稳定运行，但长期在碱性条件下使用色谱柱仍然会影响色谱柱的寿命。

使用流动相 A 保存色谱柱 3 天后的谱图：

希望这些技巧有助于您的实验室平稳运行。