奶制品经高温处理后品质会受到不同程度的影响，而糠氨酸正是奶制品经高温处理后发生美拉德反应的产物，因此测定奶制品中糠氨酸的含量是衡量其经高温处理后变化程度的手段之一。通常情况下，采用巴氏灭菌法消毒的奶制品因处理温度不高、处理时间不长等因素，而与未经处理的原奶相似，其中的糠氨酸含量较低，而成品奶粉因处理方式不同等原因，糠氨酸含量高很多。因此在农业部行业标准中，将糠氨酸的含量测定作为区分巴氏杀菌乳和 UHT 灭菌乳中复原乳的手段之一。
糠氨酸的极性很强，在普通反相 C18色谱柱上的保留不好，不容易与经强酸处理后产生的大量极性杂质分离。因此所用色谱条件比较特殊，需要使用离子对试剂或极低比例的有机相才能勉强分离极性杂质。而使用离子对试剂又会对色谱柱造成很大伤害，导致色谱柱变性并降低方法的一致性。而有机相比例低的色谱条件则需要特殊的耐水性色谱柱及高性能色谱仪器配合。这给糠氨酸的测定带来了困难。
安捷伦采用 Agilent 1290-II 四元梯度液相色谱系统，结合具有表面多孔填料的 Agilent Poroshell 120SB-C18 色谱柱，在农业部行业标准《巴氏杀菌乳和 UHT 灭菌乳中复原乳的鉴定》(NY/T 939-2016) 的基础上建立了快速、高灵敏度分析奶制品中糠氨酸的超高效液相色谱方法。
本方案以脱脂奶粉、普通婴儿配方奶粉、A2婴儿配方奶粉、全脂奶粉、原奶及市场上售卖的的全脂巴氏消毒鲜牛奶等六种奶制品为样品。如图 1 所示，各样品的糠氨酸组分与各自含有的杂质实现了良好分离，样品及标准样品的糠氨酸峰保留时间重现性非常好。从叠加光谱可以看出，所有糠氨酸的紫外光谱图能很好重叠，说明色谱峰的纯度很高，基本没有杂质的干扰，即使是糠氨酸含量很低的原奶和巴氏消毒奶的糠氨酸光谱图也能很好地重叠。
图 1. 标准样品与 6 种奶制品的色谱图（叠加图），小图为糠氨酸峰的叠加光谱图
低比例梯度对仪器的梯度性能要求较高，并不是所有仪器都能满足要求。保留时间的不稳定也是造成测定低含量样品时糠氨酸峰位置不确定，需要通过 LC/MS 来定性与定量分析的原因之一。如图 2，原奶及巴氏消毒奶样品中含量很低的糠氨酸的峰也可以无干扰地清晰呈现。以标准样品浓度 2 mg/L计算，糠氨酸含量最高的脱脂奶粉样品中糠氨酸溶液浓度约为21 mg/L，而糠氨酸溶液浓度很低的巴氏杀菌乳中仅为 0.16 mg/L。
图 2. 放大的色谱图
相比行业标准在超高效液相色谱方法中施行的等度条件，该方法具有更高的灵敏度，每次进样均采用高比例有机相冲洗杂质并进行平衡，可有效除去干扰杂质、避免杂质对分析的干扰，从而延长色谱柱的寿命，并使总分析时间缩短。使用流通式自动进样器后，无需用强有机溶剂清洗针内部，因此可以采用纯水作为针外壁及针座的清洗溶液，有效避免了样品中的高浓度盐酸对进样器针座的腐蚀。
若您对本方案感兴趣，请点击文末“阅读原文”，获取完整解决方案。
本文使用权归安捷伦科技（中国）有限公司所有，未经授权请勿转载至其他公众号，如需转载，请与工作人员联系，并注明出处。
首页
