蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物、或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质蜂蜜为蜜蜂采集花蜜，经自然发酵而成的黄白色粘稠液体。蜂蜜被誉为“大自然中最完美的营养食品”，古希腊人更是把蜜看做“天赐的礼物”。中国从古代就开始人工养蜂采蜜，蜂蜜既是良药，又是上等保健品，具有多种保健功能。然而“甜蜜”背后，在蜜蜂饲养过程中所使用的诸如氨基糖苷类等抗生素给食品安全带来隐患。
蜂农不合理使用氨基糖苷类抗生素
蓄积残留危害人体健康
氨基糖苷类抗生素是一种广泛应用于动物养殖的抗生素，该类化合物该类抗生素对多种革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌有抗菌效果，是我国畜牧业、农业和水产业常用的兽药之一，也常被添加到饲料中促进动物生长发育。用于兽药的品种主要有链霉素、双氢链霉素、新霉素、卡那霉素、壮观霉素、庆大霉素潮霉素、安普霉素等。婴儿对氨基糖苷类药物敏感，AGs 能透过胎盘损伤胎盘听觉。长期使用易产生耐药性并且对耳及肾脏有严重危害。虽然这类抗生素在春季收蜜期间并不多见，但我国蜂农习惯于在夏季使用该类抗生素。欧美等国家规定食品中的氨基糖苷类抗生素的最大残留限量（MRLs）大多不超过 100μg·kg-1 。
建立蜂产品中的氨基糖苷类药物的分析检测方法对蜂产品的质量安全具有很重要的保障和监测意义。使用固相萃取结合 LC-MS/MS 同时分析蜂蜜和蜂王浆中残留的8种氨基糖苷类抗生素的方法。
如何检测氨基糖苷类抗生素？
安捷伦应用支持团队与中国农业科学院蜜蜂研究所用户合作开发了基于固相萃取与 LC-MS/MS 同时分析蜂蜜和蜂王浆中残留的 8 种氨基糖苷类抗生素的方法。该方法采用磷酸盐缓冲溶液提取样品，经 Nexus WCX 和 Plexa PCX 分别针对不同的目标分析物萃取净化后进行 LC-MS/MS 分析。评价了 Bond Elut Plexa PCX 和 Bond Elut Nexus WCX 对 8 种不同氨基糖苷类药物的吸附和保留情况，发现大多数氨基糖苷类药物在两种SPE柱中均具有很好的保留和洗脱性能，仅有链霉素和双氢链霉素在 PCX柱上保留太强较难洗脱，而在 WCX 上却可以有很好的保留和洗脱性能。因此方法配合使用两种 SPE 柱来完成对 8 种氨基糖苷类药物的分析。
图 1. 本实验固相萃取操作流程
方法的线性范围为 10ng/mL~1µg/mL，两种蜂产品基质中三个添加水平下的浓度平均回收率分别为 76.42%~108.95% 和 74.61~113.70%，RSD 均小于 10%，方法的定量限为 15~35µg/Kg，检测限为 5~12.5µg/Kg。
表 1. 蜂蜜中样品中方法确认结果（n=3）
图 2. 25ng/ml 8 种氨基糖苷类抗生素标品的 MRM 谱图
蜂产品和动物源食品中氨基糖苷类药物
全方位分析解决方案”网络研讨会
9 月 20 日 10：00-11：30
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主讲人
周金慧 副研究员 中国农业科学院蜜蜂研究所
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