食品中二氧化硫检测方法初探（二）
(六)酶光度分析法
原理是在pH3.6的NaAC-HAC介质和亚硫酸盐氧化酶存在下， 亚硫酸盐被氧化成硫酸根， 在过氧化氢酶作用下,用3,3,5,5 一四甲基联苯胺显色, 在650nm波长下间接测定亚硫酸盐的含量。
该法灵敏度高，可以检测痕量的二氧化硫，但是样品前处理较为繁琐。
(七)快速检测试剂盒
目前市场上还出现了食品中二氧化硫现场快速检测试剂盒、仪器，其原理是食品中的二氧化硫与显色剂反应生成有色化合物，采用目视比色分析方法， 直接在二氧化硫快速检测色阶卡上读出食品中二氧化硫的含量。
该仪器具有操作简单，使用方便，可随身携带，即时现场检测，检测速度快，样品和试剂用量少，无污染等优点，但是灵敏度低，不适合大批量样品的精确测定。
三、创新的食品中二氧化硫检测技术——全自动间断化学分析技术检测法
(一)简介
近年来, 食品中超量使用及滥用亚硫酸盐的现象非常严重, 加强对食品中二氧化硫及亚硫酸盐的监督和检测己成为急需解决的问题，研究与应用二氧化硫及亚硫酸盐含量的快速测定技术, 是实现监督管理的有效措施之一。食品安全的保障依赖于可靠的质量监控，因此迫切需要一种操作简单、自动化及智能化程度高、分析成本低、检测快速且灵敏度高的分析方法。运用全自动间断化学分析仪检测食品中的二氧化硫，不仅可以在实验室实现自动化及智能化，而且由于其分析速度极快、灵敏度极高，可实现二氧化硫的微量分析，更为重要的是此技术分析成本极低，污染极小，降低了实验对人体的危害，经济价值高， 必将成为食品中二氧化硫快速检测的主流技术，是当前和今后一段时期内食品中二氧化硫快速检测的首选方法， 为政府部门的市场监督及食品生产厂家的自我监控提供有力的技术保障。
全自动间断化学分析仪是使传统比色法检测自动化的一种分析检测仪器，其完全模拟传统比色法，将待测样品及相应的反应试剂按照一定的比例自动加入比色皿中，待测物浓度与生成物颜色深浅成正比关系，经仪器比色计检测生成物吸光强度，通过标准曲线，自动计算样品中待测组分的浓度。全自动间断化学分析仪可实现多达119个样品的多个待测物的同时测定，测定过程全程由专业仪器软件控制和监控，实现分析测试过程的自动化、智能化。
(二)原理：
通过进样臂将样品组分和试剂组分加入至指定的恒温反应装置中进行反应并直接读取数据。亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物，并在550nm波长处测定。
(三)前处理：
1.水溶性固体样品如白砂糖等可称取约3-5g均匀样品，以少量溶解，置于100ml的比色管中，加入4ml氢氧化钠溶液(20g/L)，5min后加入4ml硫酸(1+71)，然后加入20ml四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。
2.其他固体样品如饼干、粉丝等可称取约3-5g研磨均匀的样品，以少量水湿润并移入100ml比色管中，然后加入20ml四氯汞钠吸收液，浸泡4小时以上，若上层不澄清可加入亚铁氰化钾及乙酸锌溶液各2.5ml，最后用水稀释至100ml刻度，过滤后备用。
3.液体样品如饮料可直接取3-5.0g样品至于100ml比色管中，以少量水稀释，加入20ml四氯汞钠吸收液，摇匀，浸泡4小时以上，最后用水稀释至刻度，过滤后备用。
(四)分析步骤
1. 将过滤好的样品放置于样品盘中;
2. 将配制好的试剂放置于试剂盘中;
3. 将配制好的标准溶液(3ug/ml)，启动自动稀释器，将标准曲线的梯度制作成0-3 ug/ml;
4.编辑工作列表，包括标准点编辑、样品编辑、试剂编辑;
5.启动仪器分析：测速为60个样/小时
6.收集结果数据;
(五)全自动间断化学分析技术的优势
1.仪器易操作
操作者只需将样品和化学试剂放置在指定的位置并编辑工作列表，然后启动分析程序，整个操作过程小于3分钟。
2.分析速度快
二氧化硫的分析速度为60个样/小时，批量分析能力强，大大解放了实验室劳动力。
3.仪器自动化及智能化程度高
包括标准曲线的自动制作、超标样品的自动稀释及重分析、废液自动收集、比色皿自动清洗及光路校准、试剂或样品缺少警报、故障自动警报等。
4.仪器灵敏度高
最低检测的准确量为0.8mg/Kg，优于经典手工分析法的1mg/Kg。
5.方法稳定性强
精密度高，RSD小于等于2%。批次间稳定性强，批次间的相对标准偏差小于2%。
6.方法准确度高
样品回收率均处于90-110%之间。
7.方法可比性强
与手工经典分析法比较，样品间的差异性均小于5%。
8.分析成本低
仪器最大试剂消耗量仅为0.7ml，为经典分析法的二十分之一，且仪器为整机分析模式，所需要的耗材少，一年维护成本只需1000-3000元。
9.保障实验人员人身安全
仪器含有密封式的废液收集装置，加上仪器的自动取样、取试剂及自动清洗比色皿等功能，最大限度地保障了操作者的人身安全，同时也防止了分析对实验室的污染，更为重要的是降低了实验过程对环境的二次污染。
(六)与深圳出入境检验检疫局食检中心合作研发本项目的部分实验数据
1.斜率实验
|
量程范围 |
线性回归方程 |
线性相关系数r |
a值 |
|
0-1mg/l
|
y=0.1923x-0.0010 |
0.9994 |
0.1923 |
|
y=0.1927x-0.0014 |
0.9995 |
0.1927 |
|
|
y=0.1966x+0.0004 |
0.9999 |
0.1966 |
|
|
y=0.1933x+0.0053 |
1 |
0.1933 |
|
|
y=0.1938x+0.0046 |
0.9993 |
0.1938 |
表1
由表1数据说明，线性较好，斜率稳定，a值始终处于0.192至0.196之间，方法稳定性强。
2.灵敏度实验
|
编号 |
称样量g |
处理批次 |
加标情况 |
检测结果mg/l |
RSD% |
加标回收率% |
|
1 |
5.056 |
不加标 |
0.0927 |
3.42 |
空白平均值为0.0915,标准偏差值为0.00313 |
|
|
2 |
4.996 |
不加标 |
0.0939 |
|||
|
3 |
5.027 |
不加标 |
0.0912 |
|||
|
4 |
5.032 |
不加标 |
0.0945 |
|||
|
5 |
4.998 |
不加标 |
0.0894 |
|||
|
6 |
5.095 |
不加标 |
0.0922 |
|||
|
7 |
5.003 |
不加标 |
0.0935 |
|||
|
8 |
5.015 |
不加标 |
0.0849 |
|||
|
9 |
5.115 |
（一） |
加标0.04ppm |
0.1326 |
0.69 |
102.75% |
|
10 |
5.062 |
加标0.04ppm |
0.1348 |
108.25% |
||
|
11 |
4.993 |
加标0.04ppm |
0.1337 |
105.50% |
||
|
12 |
5.018 |
加标0.04ppm |
0.1326 |
102.75% |
||
|
13 |
5.024 |
加标0.04ppm |
0.1337 |
105.5% |
||
|
14 |
5.022 |
加标0.04ppm |
0.1332 |
104.25% |
||
|
15 |
5.001 |
加标0.04ppm |
0.1325 |
102.5% |
||
|
16 |
5.036 |
加标0.04ppm |
0.1319 |
101% |
||
|
17 |
5.004 |
（二） |
加标0.04ppm |
0.1319 |
1.3 |
101% |
|
18 |
5.034 |
加标0.04ppm |
0.1295 |
95% |
||
|
19 |
5.036 |
加标0.04ppm |
0.1318 |
100.75% |
||
|
20 |
5.057 |
加标0.04ppm |
0.1297 |
95.5% |
||
|
21 |
5.061 |
加标0.04ppm |
0.1288 |
93.25% |
||
|
22 |
5.012 |
加标0.04ppm |
0.1297 |
95.5% |
||
|
23 |
5.008 |
加标0.04ppm |
0.1335 |
105% |
||
|
24 |
5.013 |
（三） |
加标0.04ppm |
0.1338 |
1.43 |
105.75% |
|
25 |
4.997 |
加标0.04ppm |
0.1332 |
104.25% |
||
|
26 |
5.005 |
加标0.04ppm |
0.1364 |
112.25% |
||
|
27 |
5.014 |
加标0.04ppm |
0.1319 |
101% |
||
|
28 |
5.038 |
加标0.04ppm |
0.1302 |
96.75% |
||
|
29 |
5.029 |
加标0.04ppm |
0.1314 |
99.75% |
||
|
30 |
4.997 |
加标0.04ppm |
0.1327 |
103% |
||
|
31 |
5.025 |
加标0.04ppm |
0.1307 |
98% |
||
|
32 |
4.997 |
加标0.04ppm |
0.1339 |
106% |
表2
由表2数据表明，采用间断化学分析仪测定食品中的二氧化硫具有较好的灵敏度，其最低检测浓度为0.04mg/L,即0.8mg/Kg。
3.精密度实验
由表2数据表明，用间断化学分析仪测定三批食品中的二氧化硫，批次间数据稳定性好(RSD=1.38)，同批样品的相对标准偏差小(小于2%)，精密度高。
4.准确度实验
由表2数据表明，用间断化学分析仪测定食品中的二氧化硫的回收率较高，样品回收率均处于95%-105%间，准确度高。
5.间断化学分析法与经典分析方法样品数据比较
|
编号 |
样品类型 |
手工比色法结果（mg/Kg） |
间断化学分析法结果（mg/Kg） |
偏差(100%) |
|
1 |
鲜龙眼 |
4.35 |
4.54 |
4.27 |
|
2 |
鲜龙眼 |
2.33 |
2.27 |
2.6 |
|
3 |
鲜龙眼 |
2.74 |
2.68 |
2.21 |
|
4 |
鲜龙眼 |
2.51 |
2.39 |
4.89 |
|
5 |
鲜龙眼 |
2.13 |
2.22 |
4.13 |
|
6 |
鲜龙眼 |
2.81 |
2.74 |
2.52 |
|
8 |
银耳 |
22.17 |
22 |
0.76 |
|
9 |
蛋白粉 |
19.49 |
18.98 |
2.65 |
|
10 |
面条 |
6.13 |
5.98 |
2.47 |
|
13 |
腊肉 |
3.37 |
3.51 |
4.06 |
|
14 |
饮料 |
1.09 |
1.14 |
4.48 |
|
16 |
饮料 |
1.24 |
1.22 |
1.62 |
|
17 |
饮料 |
1.78 |
1.74 |
2.27 |
|
18 |
饮料 |
1.59 |
1.67 |
4.9 |
|
20 |
果脯 |
7.81 |
7.56 |
3.25 |
|
21 |
果脯 |
8.02 |
7.89 |
1.63 |
|
22 |
当归 |
10.33 |
10.11 |
2.15 |
|
23 |
苹果 |
2.21 |
2.17 |
1.82 |
|
25 |
苹果 |
2.44 |
2.53 |
3.62 |
|
26 |
鲜龙眼 |
3.33 |
3.25 |
2.43 |
|
27 |
鲜龙眼 |
4.47 |
4.54 |
1.55 |
|
28 |
鲜龙眼 |
4.74 |
4.68 |
1.27 |
|
29 |
鲜龙眼 |
5.79 |
5.66 |
2.27 |
|
30 |
饮料 |
1.9 |
1.81 |
4.85 |
|
31 |
饮料 |
3.17 |
3.32 |
4.62 |
|
32 |
饮料 |
4.14 |
4.33 |
4.48 |
表3
由表3数据表明，间断化学分析仪法与手工经典分析法比较，样品间的差异性均小于5%，无显著性差异，并且此次分析的样品类型较多，实验排除了样品多样性引起的误差。
