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食品中常用防腐剂（抗氧化剂、保鲜剂）完全筛选方法
常用的食品防腐剂有苯甲酸类、山梨酸类、对羟基苯甲酸酯类、丙酸钙(钠)、乳酸钙(钠)、双乙酸钠、脱氢乙酸等。
具有防腐作用但目前不作为食品添加剂使用、易被滥用的防腐剂有水杨酸、对羟基苯甲酸、间羟基苯甲酸等。
保鲜及抗氧化剂有丁羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和特丁基对苯二酚的测定(TBHQ)、对叔丁基苯酚、2-苯基苯酚、2-萘酚、4-苯基苯酚等。
食品防腐剂主要通过三种途径起到防腐作用：1.抑制微生物细胞壁的形成;2.影响细胞膜的功能;3.抑制蛋白质的合成或使蛋白质变性。
每一种防腐剂，主要以一种途径对微生物产生作用，因此，单一使用一个防腐剂，“抗菌谱”会比较小，并且往往需要比较大的浓度，容易超标。
许多食品、特别是营养丰富的食品，会常常联合使用多种防腐剂，以扩大“抗菌谱”，降低单个防腐剂的浓度，提升防腐效果，延长食品保存时间。例如苯甲酸类和三梨酸类防腐剂经常会联合使用，提高防腐效果。
现行的国标方法有一些是同时检测多种防腐剂的，如《国家食品安全标准 GB 21073-2010乳和乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定》等，非常合理地结合食品行业的特点制定相应的检测方法。
但还有一些标准，只是单一的检测某一种防腐剂，而对一些超出使用范围的“合法的”防腐剂没有做相应的检测规定，容易造成“符合标准的不安全产品”的产生;而对于一些非法的防腐剂，目前还缺少相应的检测方法。
针对这种现象，结合防腐剂的物理化学性质，我们研究出一套解决方案，力求用简单的步骤，一次性分析尽可能多的防腐剂。
首先我们把防腐剂分成两大类：水溶性的和脂溶性的。水溶性的防腐剂主要有苯甲酸类、羟基苯甲酸类(非法防腐剂)、山梨酸类、小分子有机酸类等(乳酸、丙酸、双乙酸)，这些防腐剂只要用于水溶性或水溶性为主的食品中，如饮品、糕点、调味料等。
脂溶性防腐剂(保鲜剂)主要有羟基苯甲酸酯类、丁羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)和特丁基对苯二酚(TBHQ)、对叔丁基苯酚、2-苯基苯酚、2-萘酚、4-苯基苯酚等，这些添加剂主要用在含油较多食品或干果等食品中。
防腐剂(保鲜剂)只有在充分溶解或均一分布在食品介质中，才能发挥防腐保鲜效果，因此，根据食品基质状况，大致可以判断可能含有哪一类防腐剂(保鲜剂)，选用合适的提取纯化方法，进行测定。
此方案的特点是：无论是防腐剂(保鲜剂)是水溶性的还是脂溶性的，都是采用同一种净化小柱和同一根HPLC色谱柱，具有非常广泛的适用性，方便使。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
HPLC色谱仪1(Agilent 1200)
HPLC色谱仪2(HITACHI L2000)
SPE减压装置(Phenomenex)
SPE净化小柱：Strata-X-A 200mg/3mL(P/N 8B-S123-FBJ)
如样品量大，或富含有机酸的样本，选用 Strata-X-A 500mg/3mL(P/N 8B-S123-HBJ)
HPLC色谱柱：Synergi Polar-RP 4μ 250×4.6mm (P/N 00G-4336-E0)
水溶性防腐剂方案：
提取：
1、 水溶液样品：精密取样品10mL,加0.1g碳酸氢钠，充分溶解，含CO2样品超声除去，用pH试纸检测溶液pH为7左右(如pH<7,继续添加碳酸钠调pH至7)，0.45μm滤膜滤过，续滤液作为待净化溶液。
2、 半固体样品和固体样品：精密取样品1～5g,加0.1M的碳酸氢钠溶液10～20mL，超声溶解，溶液0.45μm滤膜滤过，续滤液作为待净化溶液。
净化：
SPE小柱：Strata-X-A 200mg/3mL(P/N 8B-S123-FBJ)
活化平衡：3mL甲醇，3mL 0.1M 碳酸氢钠(pH 7)
上样：2～5mL待净化液
清洗1：水 3mL
清洗2：甲醇 3mL
吹干1min
洗脱：2mL×2 0.1% HCL 甲醇
合并洗脱液至5mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，0.45um滤膜过滤，续滤液作为待测溶液。
HPLC测定：
仪器：Agilent 1200 四元低压梯度泵，紫外-可见检测器
色谱柱：Synergi Polar-RP 4μ 250×4.6mm (P/N 00G-4336-E0)
保护柱：KJ0-4282 AJ0-6076
检测波长：0～9min,200nm;9.1～11min,270nm;11.1～25min,230nm。
进样体积：5μL
标准品浓度：乳酸、乙酸、丙酸1.0mg/ml，对羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、山梨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、没食子酸0.1mg/ml，溶剂为水。(红色字体物质注为非法添加剂)。
流动相及梯度程序：
| 时间 | 20mM磷酸二氢钾（pH2.5） | 乙腈 |
| 0 | 100 | 0 |
| 5 | 100 | 0 |
| 5.1 | 72 | 28 |
| 22 | 72 | 28 |
| 22.1 | 100 | 0 |
| 25 | 100 | 0 |
10种水溶性防腐剂标准品图谱
乳酸(乳酸钙)、乙酸(双乙酸钠)、丙酸钠放大图谱(200nm)
脂溶性防腐剂(保鲜剂)方案：
提取：精密取样品1～5g,加0.1M的氢氧化钠溶液10～20mL，超声溶解，溶液0.45μm滤膜滤过，续滤液作为待净化溶液。
净化：
SPE小柱：Strata-X-A 20mg/3mL(P/N 8B-S123-FBJ)
活化平衡：3mL甲醇，3mL 氢氧化钠溶液
上样：2～5mL待净化液
清洗1：0.1M 氢氧化钠溶液 3mL
清洗2：0.1M氢氧化钠溶液甲醇溶液 3mL
吹干1min
洗脱：2mL×2 0.1% HCl甲醇
合并洗脱液至2mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，0.45um滤膜过滤，续滤液作为待测溶液。
HPLC测定：
仪器：HITACHI L2000 四元梯度泵，L2300紫外-可见检测器
色谱柱：Synergi Polar-RP 4μ 250×4.6mm (P/N 00G-4336-E0)
保护柱：KJ0-4282 AJ0-6076
检测波长：280nm
进样体积：10μL
标准品浓度：0.1mg/mL 溶剂为甲醇
流动相及梯度程序：
| 时间（min） | 乙腈 | 水 |
| 0 | 40 | 60 |
| 2 | 40 | 60 |
| 22 | 47 | 53 |
| 23 | 95 | 5 |
| 35 | 95 | 5 |
12种脂溶性防腐剂标准品图谱
加标回收率：
10种水溶性防腐剂
12种脂溶性防腐剂、抗氧化剂
名称 回收率 RSD n=5
乳酸 83.3% 4.3%
防腐剂、抗氧化剂分析启动包
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