环渤海第一届曁天津市第十九届色谱学术大会报告
在线正/反相二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用用于大鼠腹膜表层的磷脂轮廓分析
北京大学化学与分子工程学院 刘虎威 教授
北京大学化学与分子工程学院刘虎威教授作了题为《在线正/反相二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用用于大鼠腹膜表层的磷脂轮廓分析》的报告，主要介绍了磷脂类化合物的结构、特点和分类，以及磷脂类化合物的分析分离方法，并以大鼠实验为例，讲解了在线正/反相二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用用于大鼠腹膜表层的磷脂的分离分析和分子鉴定。
磷脂是生物体内一类重要的物质，他们是生物膜的主要组成部分，参与脂类化合物的体内代谢过程和信号传导过程；生物体内或细胞膜磷脂成分的改变与生物体的生理病理状态密切相关（与磷脂有关的疾病，如动脉粥样硬化、糖尿病、肥胖症、帕金森综合症等）。因此，准确分析生物体内磷脂成分能够为临床诊断与疾病监测提供依据。
磷脂类化合物主要由多元醇骨架、极性头部和疏水尾部三部分组成，根据多元醇骨架的不同可以分为甘油磷脂和鞘磷脂两大类。甘油磷脂是以甘油作为磷脂骨架，它的甘油骨架C1和C2位被脂肪酸酯化，形成长链脂肪酸的疏水尾部。C3位被磷酸酯化，同时磷酸会进一步被另一极性醇酯化，形成磷脂的极性头部。根据极性头部的不同甘油磷脂可以分为不同的类别，如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸等等。鞘磷脂以鞘氨醇为骨架，由鞘氨醇、脂肪酸和磷酰胆碱（少数是磷酰乙醇胺）组成。
在目前分离分析磷脂类化合物的方法中以液相色谱质谱联用技术的灵敏度最高，抗干扰能力最好，同时通过多级质谱技术能够对磷脂分子进行鉴定。而分离分析磷脂类化合物的两种液相色谱方法-正相液相色谱（NPLC）和反相液相色谱（RPLC）的单独使用都无法达到最佳的分离效果，NPLC方法是针对极性头部不同分离脂不不同类别，RPLC方法是针对脂肪酸链的不同分离脂的不同分子种属。因此，采用将NPLC和RPLC偶联的二维液相色谱方法，是可以得到更好的分离效果，更多的磷脂分子信息。
刘教授采用在线正/反相二维液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用方法，对鼠腹膜表层的磷脂轮廓进行了分离分析，并且对检出的磷脂组分进行了结构鉴定和碎裂机制研究。研究成果将对临床诊断与疾病监测起到强有力的指导作用。
聚合物整体柱在体内药物分析及蛋白分离的应用
河北大学药学院 杨更亮教授
河北大学药学院杨更亮教授作了题为《聚合物整体柱在体内药物分析及蛋白分离的应用》的报告，主要介绍了聚合物整体柱的制备及其在分离蛋白等方面的应用。
近年来，高效液相色谱方法（HPLC）在分离分析领域中扮演着越来越重要的角色。而其中，色谱柱是整个色谱系统的核心，聚合物整体柱的开发和应用弥补了传统的填充柱的诸多缺点。目前所报道的聚合物整体柱虽然对蛋白质叶具有较好的分离能力，但是聚合物的结构难以控制均匀，且聚合完成后需要进行进一步的修饰，步骤繁琐，耗时耗力。
杨教授给出了一种新型有机无机复合聚合物整体柱的制备方法，该制备过程利用原子转移自由基聚合（ATRP）机理进行聚合，可以通过改变单体、引发剂以及催化剂的比例来控制自由基的活性，从而获得结构均匀的聚合物。典型的制备方案为：功能单体GMA（1.1mL）、交联剂EDMA（0.6mL）、良溶剂环己醇（3.4mL）、不良溶剂正十二醇（0.4g）和引发剂AIBN（30mg）的混合液超声10分钟，再通氮气15分钟除氧后，加入密封两端的不锈钢柱管中，55℃恒温反应24h。将色谱柱接入高效液相色谱系统，先用THF而后用甲醇冲去柱内的致孔剂、反应未尽的单体以及其它可溶性产物，即得到聚合物整体柱。
杨教授用制备的聚合物整体柱对蛋白质进行分离纯化，分别考察了缓冲盐的种类、浓度和pH值对蛋白在整体柱上保留行为的影响。随后，改变流速来考察分离蛋白的情况，发现当流速为6ml/min时，四个标准蛋白在一分钟内得到了良好的分离，说明蛋白的分离不受流速的影响，也说明该整体柱具有良好的通透性能。同时，杨老师用该柱进行了牛奶中三聚氰胺的检测实验，以及整体柱离子特性和疏水特性的实验。另外，利用金属-有机络合凝胶（MOC）模板法制备3D网络骨架的P（GMA-EDMA）整体柱仍有尚待解决的问题：1）骨架和孔径尺寸的均一性还不够好；2）金属离子会有残留，部分环氧基团水解，不利于进一步修饰。
该聚合物整体柱的制备利用了原子转移自由基（ATRP）的原理，并采用引发剂AIBN引发聚合，改善了传统的原位自由基聚合的链转移链终止所导致的分子量分布范围宽、聚合物不均匀等缺点，改善了聚合物整体柱的颗粒堆积致孔，得到了具有较为均匀的骨架结构的聚合物整体柱，且无需经过化学修饰即可对蛋白进行快速高效的分离分析。
