查看完整版本请点击这里：
考马斯亮蓝法测定各上清液中蛋白质含量
关键词：农兽药残留 环境检测标准物质 标准品进口 美国USP标准品考马斯亮蓝法测定各上清液中蛋白质含量
【实验原理】
CBBG-250是双色型蛋白质染料，其游离型呈红棕色，最大吸收峰为465nm。在酸性环境下可与蛋白质结合，结合型CBBG-250呈蓝色，最大吸收峰移至595nm。在一定条件下，595nm处的吸光度增加与蛋白质含量成正比。染料与蛋白质能迅速结合，2分钟内达到平衡，1小时内保持稳定状态。
【试剂与器材】
1．CBBG-250溶液 称取考马斯亮蓝G-250 100mg，溶于50ml 95％乙醇中，加入85％磷酸l00ml，用蒸馏水定容至lL。
2．1mg/ml蛋白质标准溶液。
【操作步骤】
1．蛋白质标准曲线的制作除空白管外各管均作平行管。
蛋白质标准曲线的制作
加入物(m1) 空白管 1×2 2×2 3×2 4×2 5×2
蛋白质标准液 一 0．02 0．04 0．06 0．08 0．10 。。
蒸馏水 0．10 0．08 0．06 0．04 0．02 一
CBBG一250溶液 5．0 5．0 5．0 5．0 5．0 5．0
蛋白质浓度(mg／m1) 0 0．02 0．04 0．06 0．08 0．10
混匀后，室温放置2分钟后，在1小时内595nm波长下测定各管吸光度，以空白管调零。然后以各管吸光度值的平均值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制蛋白质标准曲线。
2．各上清液中蛋白质含量的测定 除空白管外各管均作平行管。
混匀后，室温放置2分钟后，在1小时内595nm波长下测定各管吸光度，以空白管调零。根据各管吸光度值的平均值在校正曲线上查取各管的蛋白质浓度。
【注意事项】
1．各上清液的蛋白质含量不同，需要根据具体情况将上清液稀释后再测定，结果乘以稀释倍数即可。
2．本实验中所测得的蛋白质为总蛋白，包括ACP在内的上清液中所有的蛋白质。
查看完整版本请点击这里：
考马斯亮蓝法测定各上清液中蛋白质含量
考马斯亮蓝法测定各上清液中蛋白质含量
考马斯亮蓝法测定各上清液中蛋白质含量