一、技术简介 实时PCR(real-time PCR),属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。 Real time PCR 的定量使用荧光色素,目前有二种方法。一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素,例如SYBR Green荧光染料;另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针(probe),如Taqman探针。两种方法原理不同。SYBR Green荧光染料游离时不发光,当反应体系中存在双链DNA时,SYBR Green与双链DNA结合,此时才发光。Taqman探针带有一个荧光基团和一个淬灭基团,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭基团则在3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5′-3′外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,此时荧光基团发出的荧光信号可以被检测到。real time PCR 与 reverse transcription PCR 相结合,能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR(quantitative RT-PCR)”。二、实验流程1. 提取RNA。2. DNAse I 消化样品RNA 中的DNA。3. RNA琼脂糖凝胶电泳。4. RNA反转录为cDNA。5. cDNA与引物质量检测。6. 利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况。7. 定量 PCR检测。8. 分析扩增曲线和溶解曲线。三、服务说明及结果1. 客户提供:样本。 2. 公司提供:高质量的RNA、扩增曲线图、熔解曲线图、完整报告。3. 实验周期:5-10个工作日。
实时荧光定量PCR(real-time PCR)价格
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