所需材料:
1、PBS
2、原代骨髓单核细胞BMMs
3、怀信生物破骨诱导分化培养基
操作方法与步骤
为了得到最好的诱导结果,请执行下述操作步骤:
1、骨髓单核细胞的分离:分离雌性、4-5周龄的C57BL/6小鼠的股骨和肱骨,剪开两端,用注射器冲洗管腔,收集细胞,200目筛网过滤,收集滤液,1200rpm/min,5min, 去上清,37℃,5%CO2培养箱中培养16-24h。收集未贴壁细胞,1200rpm/min,5min, 去上清。
2、破骨细胞诱导:将上述沉淀用37℃预热的破骨诱导分化培养基重悬,计数,按3X104/cm2铺板,37℃、5%的CO2环境中培养。
3、每隔48h换液,诱导分化8-12天。
注意:
1、BMMs分离的效果不好
2、长时间在培养箱外观察
3、培养基无预热
4、 晃动培养板
5、 培养箱频繁开关
6、换液未按照上述规程操作