实时PCR检测原理为TaqMan探针法,是在反应体系中加入一个荧光标记探针,探针的5′端标以荧光发射基团FAM, 3′端标以荧光猝灭基团TAMRA。实时PCR过程中,利用Taq酶的5′→3′外切核酸酶活性释放荧光信号。模板每复制一次,便释放一个荧光信号,根据荧光强弱可对模板进行准确定量。由于实时PCR采用闭管操作,克服了常规PCR的污染问题,使其具有很高的特异性。...
而实时PCR检测法阳性率明显高于抗酸染色法和改良罗氏培养法,且特异性为100%,这和荧光定量PCR的原理和它所采用的一系列新技术密切相关。尤其是结核病患者经药物治疗或体内出现了细胞壁缺损的L型细菌导致分离培养结果呈阴性时,此方法检测结果仍不受影响。在本实验中我们只用阴、阳性来表示结果,但实时PCR可以做到相对定量,且定量结果可以指导临床用药和疗效评估。...
,实时荧光PCR具备几个方面的优势:1、 由于实时荧光PCR采用封闭的检测模式,因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR要小得多。...
二、实时荧光定量PCR如要对DNA、RNA样品进行精确定量研究,就需要采用实时荧光定量PCR,根据检测实时荧光PCR产物的方式不同,实时荧光定量PCR主要有DNA结合染料法、基于探针的化学法、淬灭染料引物法等类型。1. DNA 结合染料法原理 :应用一种带有荧光的、非特异的DNA结合染料检测PCR过程中积累的扩增产物。应用于核算定量和基因表达验证。...
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