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做博士生的三个境界
HEC_css 发布于 2011-08-10 10:25:05
参照王国维的三个境界的形式，感觉读研究生也有三个境界。
1. active。在研究活动中，比如会议、学术讨论中表现活跃，能积极高效地完成研究任务，并积极思考研究内容的意义。这是只要自己愿意，就可以达到的境界。这种境界基本还处在学习阶段，很难有创新。
2. aggressive。有开拓性，在完成研究任务的同时，能开拓技术方法，更好地做好本职工作。在积极活跃的基础上，才有可能在达到这种境界。这个阶段可能有一些技术上的改进，可以出一点小文章。这个词是听王中林讲座的时候学到的。
3. initiative。自发地没事找事。在掌握了基本技术方法，并能灵活运用后，还要理解方法应用的科学意义，能够找到科学上需要的突破点，找到重要问题。自己提出问题，提出解决思路，并能有计划地完成这个工作。达到这个境界，需要阅读大量文献，对本领域有一个比较清晰的认识。一般地，这样就已经具备了独立做研究的基本条件。
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色谱柱
Jinyongchun 发布于 2009-09-05 20:52:10
液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：
一、反相色谱柱的选择
1．柱子的PH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。
2．填料的端基封尾（或称封口）
把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱
戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。（下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较）
二、液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。1、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相与样品不产生化学反应
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲 溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
b．流动相要求使用0.45 µm滤膜过滤，除去微粒杂质。
c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。三． 色谱柱的维护
1. 色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！操作步骤：
a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）
b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
2． 色谱柱的再生
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降（柱子的理论塔板数减低）。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
建议用来冲洗柱子的溶剂体积
色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
125-4mm 1.6ml 30ml
250-4 mm 3.2ml 60ml
250-10mm 20ml 400ml
选择再生方法：
极性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料）的再生：
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生： 水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水
注意：
a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。3. 色谱柱的维护
a．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）
b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围
c．避免流动相组成及极性的剧烈变化
d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理
e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中
f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。 -
科研工作中不可或缺的软件技术
tussah 发布于 2009-05-28 20:20:51
“我是站在巨人的肩膀上”，这句话对于每个科研工作者都不陌生，尤其是在当今互联网时代，这句话和每个科研工作者都密不可分，虽然我们并不一定是取得了好的成绩。而这些巨人不只是精尖行业科学技术的奠基者，也有我们许许多多的其他行业工作者。
譬如
我们可能在网络上看见一段很好的可利用视频，可是无法下载收藏利用；
我们可能某次需要移动的磁盘文件移动硬盘也不能一次搞定；
我们可能下载一个word文档却无法打印编辑；
我们可能下载了一个pdf，烦人的水印怎么也没办法清除；
我们可能在文献中看见一幅和自己工作紧密相关的坐标图，但没有办法提高质量来与自己的结果对比；
我们可能在做幻灯片时，发现插入图片的背景有碍观瞻；
我们可能上传一个较大文件，可是允许的最大单个文件却远远小于这个文件；
……
怎么办？打电话？找电脑专家？请专业人士？
算了吧，不要占用他人时间，不要花费本应该省下来的前，百度一下，解决它们。
如果您连百度一下都不愿意，那么请您站在若干网友的肩膀上吧。
一、下载网络不可直接下载的视频文件
操作要领：
1. 找到视频所在网站；
2. 清空临时文件夹（这是为了便于你寻找到将要下载的文件）；
3. 在线播放视频文件；
4. 待缓冲结束打开临时文件夹，找到你需要的视频拷贝出来（你需要的那个视频往往是临时文件夹中最大的视频文件，所以你从文件类型和文件大小就可以判断。）
5. 验证是否是你需要的文件。
点击此链接观看视频操作过程！
二、制作交叉线，毫无障碍的传递文件
操作要领：
1. 准备好普通网线的制作工具和材料：水晶头2个、网线1根、专用钳子1把；
2. 制作交叉线
A端（白橙、橙、白绿、蓝、白蓝、绿、白棕、棕）
B端（白绿、绿、白橙、蓝、白蓝、橙、白棕、棕）
3. 用网线直接连接联接两台电脑
4. 设置两台电脑的ip地址
（1） 开始→控制面板→网络和internet连接→网络连接→本地连接→属性→TC/IP协议→属性→使用下面的IP地址。
（2） 输入一个ip地址，如“192.168.
5. 在两台电脑的任意一台设置一个共享文件夹（这个文件夹一定要能够被网络用户更改），在另一台电脑上搜索设有共享文件夹的电脑（即在“搜索网络上的一台电脑”对应框内填上设有共享文件夹电脑的ip地址，此ip地址为第4步设置），此时搜索到共享文件夹。
6. 如果您的文件要从设有共享文件夹的电脑转移到另一台电脑，将文件放入共享文件夹后，在另一台电脑直接拷贝或剪切。如果是从没有共享文件夹的电脑转移到有共享文件夹的电脑，直接将文件拖入共享文件夹即可。
三、水印和密码，毫无意义
1. 去密码当然需要用到专门的软件：word去密码，pdf去密码。用法就不赘述了。
2. 不过有的pdf去掉密码之后发现中间会有几页打印出来是空白，这时需要用到一个软件solidconvertpdf，使用该软件将pdf转化成word再打印成pdf就ok啦。
3. 这里着重谈谈pdf去水印或者编辑的问题吧。
操作要领
（1） 有密码的pdf先要去密码；
（2） 简单的水印问题使用adobe acrobat professional软件就可以解决了，操作过程见视频吧。
（3） 有的水印或者是不像看到的东西是无法通过上述办法解决的，那么就转化成word编辑吧，要不就使用foxitpdfeditor编辑吧。在牛的水印，只要你舍得时间总会有办法解决的。
（4） 当然“盗高一尺，魔高一丈”，如果有新的办法加水印，请你一定相信百度后会有新的办法去水印。
以上涉及的3个软件在网上都能下载到免费版，因为太大就不附带。
点击此链接观看视频操作过程！
四、坐标图，传递的是数据信息
相关软件到下载网址：http://www.antpedia.com/viewspace-41121。
点击此链接观看视频操作过程！
五、学会抠图吧，幻灯片效果会更好
这是利用ppt中图片填充原理进行抠的操作，操作要领：
1. 原始图片修整，即是将要选取的部分最大化；
2. 获取目标形状；
3. 填充后形成目标形状的图片。
点击此连接观看视频操作过程！
六、压缩文件，传递无忧
此操作是将一个大文件压缩成几个压缩包，利于网上传递，操作要领：
1. 选择要压缩的文件；
2. 右键“添加到压缩文件”，设置压缩文件名和参数；
3. 设置每个压缩包大小，选择保存路径，压缩完成。
点击此连接观看视频操作过程！
本blog文章及内含视频由tussah撰写制作，若有疑问请到http://www.antpedia.com/mygroup-88探讨。
阅读完整内容，请到http://www.antpedia.com/viewspace-41853下载。
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高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
玩具 发布于 2008-02-13 23:29:39
高效液相色谱仪操作步骤（原文摘录自网络）：
1）过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2）对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3）打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4） 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。 冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7）设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）填写登记本，由负责人签字。
注意事项：
1）流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2）柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3）所有过柱子的液体均需严格的过滤。
）压力不能太大，最好不要超过2000 psi。 -
高效液相色谱仪操作三要点（上）
fsciq 发布于 2009-02-03 10:21:00
高效液相色谱仪（HPLC）现已成为有机化学分析的重要手段之一。同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC也已成为不可或缺的分析仪器。和其它分析仪器一样，你若想让HPLC很好地为你工作、得到可靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺利地获得理想的结果。而且良好规范的操作习惯可以延长仪器使用寿命。大家在学校或接受仪器公司培训的时候，老师或工程师会提出很多的操作注意事项。但要是总结归纳一下，最重要的有三点：脱气、过滤和冲洗。本文围绕这三点进行讨论，给新从事HPLC分析的工作者一点操作建议，希望能对正确的操作仪器有一点帮助。更欢迎有经验的专家介绍使用经验，提出好建议。
一、脱气
流动相脱气对于避免HPLC系统出问题，顺利得到一个理想的数据是一个很有效的措施。HPLC系统内是不希望有气泡存在的。HPLC泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将观察到瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。
当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。为解决这个问题，有些仪器公司设计一个反压控制器，这样可以在检测器出口提供足够的压力保持气泡始终溶解在流动相中直到它们流出检测器。当然，这个压力不能超过流通池所能承受的压力极限，否则可能损坏检测器。
紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征兆。有些检测器对空气的存在也非常敏感，但表现出的征兆与UV/VIS不同，例如有报导说，当使用荧光（FL）检测器时，流动相中溶解氧的存在可能会使一些化合物失去荧光性。此外，对于利用待测物质在电极表面发生氧化还原反应引起电流变化而进行检测的电化学（EC）检测器，对流动相中的溶解氧的存在也非常灵敏。此外，气泡的存在有时还会导致保留时间不重现。
所以，必须注意消除流动相中的空气，并且还应避免空气由管路（如PTFE管）渗透进流动相中。
如果适当地关注在使用之前脱去流动相中溶解进的空气，上述这些问题均能避免，或把影响降至最低。常用的脱气方法有如下几种：
1. 吹氦脱气法。利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但我们国内氦气价格较高，很少有实验室采用此方法。
2. 加热回流法。此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。
3. 抽真空脱气法。此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。
4. 超声波脱气法。将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。此法的脱气效果最差。
5. 在线脱气法。现在商品的HPLC仪器，均可配在线脱气机。在线脱气使用简单，低故障，有效。建议购买仪器时一定要购买，有的公司是作为选购件，所以与仪器公司谈配置时应与公司确认。
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进样器、色谱柱相关知识
miracle 发布于 2010-06-03 13:58:52
色谱柱
1. 色谱柱的构成
色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。
色谱填料： 经过制备处理后，用于填充色谱柱的物质颗粒，通常是5-10粒径的球形颗粒。
色谱柱管： 内部抛光的不锈钢管。典型的液相色谱分析柱尺寸是内径4.6mm，长250mm。
色谱柱： 也称固定相，是将色谱填料填充到色谱柱管中所构成的,其结构如图8-8所示。
2. 色谱柱的填充
干法填充： 在硬台面上铺上软垫，将空柱管上端打开垂直放在软垫上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直台面墩10-20次。
湿法填充： 又称淤浆填充法，使用专门的填充装置(图8-9)。
3. 填料的结构
色谱填料是由基质和功能层两部分构成。
基质： 又常称作载体或担体，通常制备成数微米至数十微米粒径的球形颗粒，它具有一定的刚性，能承受一定的压力，对分离不起明显的作用，只是作为功能基团的载体。常用来作基质的有硅胶和有机高分子聚合物微球。
功能层： 是通过化学或物理的方法固定在基质表面的、对样品分子的保留起实质作用的有机分子或功能团。如图8-10是硅胶基质的冠醚大分子固定相的结构示意图，功能层冠醚分子吸附或键合在硅胶基质的表面。
填料的物理结构： 分为微孔型(或凝胶型)、大孔型(全多孔型)、薄壳型和表面多孔型四种类型，如图8-11所示。
