瓢虫（liang_sp）

1. 注射泵导入校正溶液（polytyrosine 1,3,6 仪器自带）：

将样品转移毛细管直接连接到500 μL进样针上，固定于注射泵支架中，按下注射泵手柄上的黑色按钮，将手柄缓慢放下至与注射进样针接触。

2. 正离子模式校正

2.1 校正前设置

2.1.1 打开Quantum Tune Master，点击菜单栏On/Standby，激活质谱仪。

2.1.2 离子源模式为ESI，选Positive Polarity进入正离子模式。

2.1.3 进入Compound Optimization Workspace。

2.1.4 选Define Scan/Full Scan/Q1MS模式，进行全扫描，扫描范围为150-1050 u。

2.1.5 选Optimize Compound Dependent Devices，对仪器参数进行设置：

• Spray voltage设为4000 V
• Sheath Gas Pressure设为5 Arb
• Ion Sweep Gas Pressure设为0
• Aux Gas Pressure设为5 Arb
• Capillary temparature设为270℃
• Tube lens offset设为90 V
• Source CID设为0 V

2.1.6 将注射泵流速设为5 μL/min；Syringe Size选为500 μL；

2.2 建立稳定的离子流信号

2.2.1 仪器在Full Scan/Q1MS模式下稳定5-10 min，将Center Mass设为508.208 u，Scan width设为10.000 u，Scan time设为0.2 s，Peak Width设为0.7 u，Microscan设为1，其他如AutoSIM, Source CID, Data processing，Q2 CID Gas不选，最后点击Apply。

2.2.2 点击Display TIC开始显示离子流信号。

2.2.3 在Single sample/MS only 中将Optimization Mass设为508 u，在Optimize Compound Dependent Devices中选中Spray Voltage、 Sheath Gas Pressure、Aux Gas Pressure并进行优化，使离子流信号波动小于10％。

2.2.4 选Define Scan/Full Scan/Q1MS模式，进行全扫描，扫描范围为150-1050 u，m/z 182、508、997离子峰必须是质谱图中的主峰，三个峰之间的比值应在1个数量级（10）以内，峰高应在10的6次方-10的7次方之间，峰高的变异或波动应在10％以内，每个峰都应对称、不裂分，分离良好。

2.2.5 在Full Scan/Q3MS的对话框中，选择与Q1MS相同的设置（同3.4），同样观察质谱图，使达到3.4的要求。

2.3 自动校正操作

2.3.1 选System Tune and Calibration Workspace工具栏

2.3.2 选中Auto Tune-Calibration，在compound 栏中选择Polytyrosine-1，3，6。

2.3.3 选中Both对第一和第三个四级杆进行同时校正。

2.3.4 点击Start，开始自动校正。

2.3.5 若自动校正未通过，点击Undo重新保存原先手动校正设置；再点击Accept重新载入原先手动校正设置；再次点击Start，开始自动校正。

2.3.6 若自动校正通过（三个分子量的峰宽－分辨率的线性良好）。点击Accept接受校正结果。

2.3.7 如果未对负离子模式进行自动校正，系统会问是否将当前正离子模式的各参数复制到负离子模式，一般可选Yes，但也可对负离子模式进行独立的校正。

2.3.8 点击Save Calib. As对校正文件进行保存。

2.3.9 将Tune method进行保存。

3. 负离子模式的自动校正

3.1 选Display/Compound Dependent Devices菜单，将喷雾电压（Spray voltage）设为0 V。

3.2 在工具栏中选定负离子模式。

3.3 在Optimize Compound Dependent Devices中，将Spray voltage设为3000 V； Sheath Gas Pressure为15 Arb；Aux Gas Pressure为5 Arb。

3.4 选Define Scan/Full Scan/Q1MS，将Center Mass设为995 u，Scan width设为10.000 u，Scan time设为0.2 s，Peak Width设为0.7 u，Microscan设为1，其他如AutoSIM, Source CID, Data processing，Q2 CID Gas不选，最后点击Apply。TIC基峰强度应>10的6次方。

3.5在System Tune and Calibration界面下，选中Compound下拉菜单中的Polytyrosine-Neg。

3.6 选择Auto Tune-Calibration界面下的Both，点击Start，对仪器进行自动校正。

3.7 若自动校正未通过，点击Undo重新保存原先手动校正设置；再点击Accept重新载入原先手动校正设置；再次点击Start，开始自动校正。

3.8 若自动校正通过（三个分子量的峰宽－分辨率的线性良好），点击Accept接受校正结果。

3.9 如果未对正离子模式进行自动校正，系统会问是否将当前负离子模式的各参数复制到正离子模式，选No。

3.10点击Save Calib. As对校正文件进行保存。

3.11 将Tune method进行保存。

4. 系统清洗

4.1 打开Setup/Syringe Pump ＆ Sample Loop对话框，将Syringe Flow Control选中Off，点击Apply停止注射泵。

4.2 取下进样针，用甲醇：水（50：50，v/v）反复抽洗数次。

4.3 进样针吸入甲醇：水（50：50，v/v），对样品转移毛细管进行清洗。

4.4 对加热毛细管进行清洗。

5. 注意事项：

5.1 质谱检测器校正周期为1-3个月；校正液为聚酪氨酸溶液（内含酪氨酸的单体、三聚物和六聚物）。

5.2 校正用进样毛细管和实验用进样毛细管需分开保存。

5.3 校正液中不能有气泡，管路之间不能有泄漏。

5.4 正负离子转换时，要先将喷雾电压设为0，将Negative Polarity改换为Positive Polarity（或Negative Polarity改换为Positive Polarity），再将喷雾电压调回4000V（+）或3000V（－）。

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一、优化待测化合物ESI质谱条件

1 样品导入方式的建立

1.1 选择适当长度的Peek管将两端通过接头分别与液相系统和切换阀2号口相连。
1.2 选择适当长度Teflon管将一端通过接头与切换阀1号口相连，并将另一端置于废液瓶中。
1.3 选择适当长度的Peek管将一端通过接头与切换阀3号口相连，另一端通过三通分别与离子源和样品转移毛细管相连。
1.4 将200 uL左右样品溶液吸入250 uL进样注射器中。
1.5 将进样注射器通过一个接头和一个二通与样品转移毛细管另一端相连。
1.6 按住注射泵黑色释放钮将注射泵手柄升高。
1.7 将进样注射器小心置于支架上并将注射泵手柄下移至进样注射器活塞柄顶端。

2. 质谱条件优化步骤

2.1 在Tune Master界面点击On/Standby激活质谱仪。
2.2 选择离子极性模式（正离子或负离子），如需进行正负离子切换，将将Spray Voltage调至0后操作。
2.3 进入Compound Optimization Workspace。
2.4 在Define Scan窗口选择Q1MS扫描模式和Full Scan扫描类型。
2.5 在Optimize Compound Dependent Devices窗口设置下列参数：

• Spray Voltage设为3500 V
• Sheath Gas Pressure设为30 arb
• Aux Gas Pressure设为10 arb
• Capillary Temperature设为350℃
• Source CID设为0 V

2.6 激活注射泵以5 uL/min流速将进样注射器中的样品溶液导入质谱仪。

2.7 激活液相色谱泵选择适当流速将流动相导入质谱仪，观察到待测化合物的准分子离子峰峰强度在10的6次方左右，否则增大进样流速或选用浓度更高的待测化合物溶液（样品浓度一般建议1-10ug/mL,建议用甲醇或乙腈溶解）。

2.8 在Compound Optimization界面显示Single Sample窗口，选择MS Only优化模式和Syringe Pump Infusion入口类型选项。

2.9 优化Tube Lens Offset、Spray Voltage、Sheath Gas Pressure、Aux Gas Pressure和Source CID获得待测化合物稳定的准分子离子峰。

2.10记录并保存准分子离子质谱图。

2.11选择MS+MS/MS优化模式设置Parent Mass、Charge State和Num Product对子离子进行优化，优化前完成下列设置：

• 将Source CID设为0 V
• 将Collision Pressure设为1.5 mTorr
• 将Quad MS/MS Bias设为-1.0 V

2.12接受Collision Energy优化结果，并将Source CID设为优化值（由2.9得到）。

2.13记录并保存子离子全扫描质谱图。

2.14保存Tune Method文件。

3. 注意事项

3.1 待测化合物溶液浓度为1-10ug/mL
3.2 改变流动相比例和流速后应重新进行对Sheath Gas Pressure和Aux Gas Pressure进行优化
3.3 手动优化Capillary Temperature
3.4 点击Start开始自动优化程序，优化结束时点击Accept接受优化结果，或者点击Undo后再点击Accept保持优化前的仪器配置

3.5 仪器常用参数设置见下表。
 
二、优化待测化合物APCI质谱条件

1. 样品导入方式的建立

1.1 选择适当长度的Peek管将两端通过接头分别与液相系统和切换阀2号口相连。
1.2 选择适当长度Teflon管将一端通过接头与切换阀1号口相连，并将另一端置于废液瓶中。
1.3 选择适当长度的Peek管将一端通过接头与切换阀3号口相连，另一端通过三通分别与离子源和样品转移毛细管相连。
1.4 将200uL左右样品溶液吸入250uL进样注射器中。
1.5 将进样注射器通过一个接头和一个二通与样品转移毛细管另一端相连。
1.6 按住注射泵黑色释放钮将注射泵手柄升高。
1.7 将进样注射器小心置于支架上并将注射泵手柄下移至进样注射器活塞柄顶端。

2. 质谱条件优化步骤

2.1 在Tune Master界面点击On/Standby激活质谱仪。
2.2 选择离子极性模式（正离子或负离子），如需进行正负离子切换，将Discharge Current调至0后操作。
2.3 进入Compound Optimization Workspace。
2.4 在Define Scan窗口选择Q1MS扫描模式和Full Scan扫描类型。
2.5 在Optimize Compound Dependent Devices窗口设置下列参数：

• 将Discharge Current设为4.0 A
• 将APCI Vaporizer Temperature设为500℃
• 将Sheath Gas Pressure设为30 Arb
• 将Aux Gas Pressure设为10 Arb
• 将Capillary Temperature设为270℃
• 将Source CID设为0 V

2.6 激活注射泵以5uL/min流速将进样注射器中的样品溶液导入质谱仪。

2.7 激活液相色谱泵选择适当流速将流动相导入质谱仪，观察到待测化合物的准分子离子峰峰强度在10的6次方左右，否则增大进样流速或选用浓度更高的待测化合物溶液。

2.8 在Compound Optimization界面显示Single Sample窗口，选择MS Only优化模式和Syringe Pump Infusion入口类型选项。

2.9 优化Tube Lens Offset、Sheath Gas Pressure、Aux Gas Pressure和Source CID获得待测化合物稳定的准分子离子峰。

2.10记录并保存准分子离子质谱图。

2.11选择MS+MS/MS优化模式设置Parent Mass、Charge State和Num Product对子离子进行优化，优化前完成下列设置：

• 将Source CID设为0 V
• 将Collision Pressure设为1.5 mTorr
• 将Quad MS/MS Bias设为-1.0 V

2.12接受Collision Energy优化结果，并将Source CID设为优化值（由2.9得到）。

2.13记录并保存子离子全扫描质谱图。

2.14保存Tune Method文件。

3. 注意事项

3.1 待测化合物溶液浓度一般为1-10ug/mL。
3.2 改变流动相比例和流速后应重新进行对Sheath Gas Pressure和Aux Gas Pressure进行优化。
3.3 手动优化Capillary Temperature且不能高于270℃。
3.4 点击Start开始自动优化程序，优化结束时点击Accept接受优化结果，或者点击Undo后再点击Accept保持优化前的仪器配置

3.5 仪器常用参数设置见下表。

来源：现代仪器

一 、载气钢瓶的使用规程
 
1 钢瓶必须分类保管，直立因定，远离热源，避免暴晒及强烈震动，氢气室内存放量不得超过二瓶。 
2 氧气瓶及专用工具严禁与油类接触。 
3 钢瓶上的氧气表要专用，安装时螺扣要上紧。 
4 操作时严禁敲打，发现漏气须立即修好。 
5 用后气瓶的剩余残压不应少于980 kPa。 
6 氢气压力表系反螺纹，安装拆卸时应注意防止损坏螺纹。

二 、减压阀的使用及注意事项
 
1 在气相色谱分析中，钢瓶供气压力在9.8-14.7 MPa。
 
2 减压阀与钢瓶配套使用，不同气体钢瓶所用的减压阀是不同的。氢气减压阀接头为反向螺纹，安装时需小心。使用时需缓慢调节手轮，使用权后必须旋松调节手轮和关闭钢瓶阀门。 

3 关闭气源时，先关闭减压阀，后关闭钢瓶阀门，再开启减压阀，排出减压阀内气体，最后松开调节螺杆。

三 、微量注射器的使用及注意事项

1 微量注射器是易碎器械，使用时应多加小心，不用时要洗净放入合内，不要随便玩弄，来回空抽，否则会严重磨损，损坏气密性，降低准确度。
 
2 微量注射器在使用前后都须用丙酮等溶剂清洗。 

3 对10-100微升的注射器，如遇针尖堵塞，宜用直径为0.1 mm的细钢丝耐心穿通,不能用火烧的方法。
 
4 硅橡胶垫在几十次进样后，容易漏气，需及时更换。
 
5 用微量注射器取液体试样，应先用少量试样洗涤多次，再慢慢抽入试样，并稍多于需要量。如内有气泡则将针头朝上，使气泡上升排出，再将过量的试样排出，用泸纸吸去针尖外所沾试样。注意切勿使针头内的试样流失。
 
6 取好样后应立即进样，进样时，注射器应与进样口垂直，针尖刺穿硅橡胶垫圈，插到底后迅速注入试样，完成后立即拔出注射器，整个动作应进行得稳当，连贯，迅速。针尖在进样器中的位置，插入速度，停留时间和拔出速度等都会影响进样的重复性，操作时应注意。
 

四 、热导池检测器的使用及注意事项

1 开启热导电源前，必须先通载气，实验结束时，把桥电流调到最小值，再关闭热导电源，最后关闭载气。
 
2 稳压阀，针形阀的调节须缓慢进行。稳压阀不工作时，必须放松调节手柄。针形阀不工作时，应将阀门处于“开”的状态。 

3 各室升温要缓慢，防止超温。
 
4 更换汽化室密封垫片时，应将热导电源关闭。若流量计浮子突然下落到底，也应首先关闭该电源。 5 桥电流不得超过允许值。

五 、氢火焰检测器的使用及注意事项

1 通氢气后，待管道中残余气体排出后，应及时点火，并保证火焰是点着的。
 
2 使用FID时，离子室外罩须罩住，以保证良好的屏蔽和防止空气侵入。如果离子室积木，可将端盖取下，待离子室温度较高时再盖上。工作状态下，取下检测器罩盖，不能触及极化极，以防触电。

3 离子室温度应大于100℃，待层析室温度稳定后，再点火，否则离子室易积水，影响电极绝缘而使基线不稳。