流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的
结果。
　　(一)　原理
　　活细胞表面保留有较完整的抗原或受体，先用特异性鼠源性单克隆抗体与细胞表面相应抗原结合，再用荧光标记的第二抗体结合，根据所测定的荧光强度和阳性百分率即可知相应抗原的密度和分布。
　　(二)　操作步骤
　　　　　制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、
　　　　　胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　用10％FCS　RPMI1640调整细胞浓度为
　　　　　　　　　5×10６～１×10７／ml
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl)
　　　　　　　　的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS
　　　　　　　　稀释)灭活正常兔血清
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓4℃ 30min
　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右
　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠
　　　　　　　　　(或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　4℃ 30min
　　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右
　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入
　　　　　　　　　1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，
　　　　　　　　　视细胞浓度加入100～500μl固定液)
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　FCM检测或制片后荧光显微镜下观察
　　　　　　　　　　(标本在试管中可保存5～7天)

　　(三)　试剂和器材
　　1.　各种特异性单克隆抗体。
　　2.　荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。
　　3.　10％ FCS RPMI1640, DPBS、洗涤液、固定液(见附录)。
　　4.　玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
　　(四)　注意事项
　　1.　整个操作在4℃下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10倍的NaN３，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。
　　2.　洗涤要充分，以避免游离抗体封闭二抗与细胞膜上一抗相结合，出现假阴性。
　　3.　加适量正常兔血清可封闭某些细胞表面免疫球蛋白Fc受体，降低和防止非特异性染色。
　　4.　细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。
　　附:
　　1. DPBS (×10, 贮存液)
　　　　NaCl 80g
　　　　KCl 2g 　　　　　蒸馏水加至1000ml
　　　　Na２HPO４ 11.5g 临用时用蒸馏水1∶10稀释
　　　　KH２PO４ 2g
　　2.　洗涤液
　　　　DPBS　　　　　　900ml
　　　　FCS 50ml (终浓度　5％)
　　　　4％NaN３50ml (终浓度0.2％)
　　3.　固定液
　　　　DPBS　　　　1000ml
　　　　葡萄糖　　　　20g (终浓度2％)
　　　　甲　醛　　　　10ml
　　　　NaN３　　　0.2g (终浓度0.02％)

　　方式比较

　　新托福通过互联网与ETS总部组成局域网，为每个人发出不同的考题。考题一次有效，不再会有题库。此外，网考通过电子方式记录答案后，将答案传输到人工评分网络，并予以客观、可靠的评分，确保考试的公平合理性。

　　雅思目前官方并未公布采用“机考”的消息，中国考生所参加的雅思考试仍然是以笔试的方式进行，考试会有一定的题库，部分题目会在考试中重复出现，2006年雅思作文的评分标准将会更加细化。

　　专家提示：新托福考试原则上考题不会重复;而雅思考试中仍然会有题库，考生可以通过一些“过来人”的考试经验，对考试背景作大致了解，但对于在网络上公布的考试答案，考生不能完全依赖。因为考试中的题目有可能极其相似，但答案却完全不同。

　　听力比较

　　新托福原来的短对话被取消，听力内容更加学术化，演讲篇幅大大加长。此外，听力部分出现了5种新题型：“选择两个正确答案的题目”、“听部分文章摘要后完成的细节题”、“根据文章内容点击图片相应位置的题目”、“通过拖动来选择答案的多选题”、“点击表格的题目”。

　　雅思听力部分会出现多个经典场景，对细节考核将更贴近国外生活要求。此外，听力部分将出现一些新场景，比如商业场景、超市、纪念品点等信息。考核题型也趋向多样化，不再是单纯考查填空或选择题。

　　专家提示：新托福听力部分的考查给予考生答题思考的时间要多于雅思，当中有个别题目可以重复，而且题型还是以选择题为主，与雅思的填空式作答相比，更符合中国学生的考试模式。

　　口语比较

　　新托福口语部分采用人机对话，模拟正式的上课讲演来考查学生。考试共有6道题目，一三五针对的是校园生活，二四六是相对学术性的题材。

　　雅思口语采用“人人对话”形式，考生可以对没有听清楚的问题要求考官重复并且可以要求考官解释卡片提上的单词与句子，更加人性化，但客观性相对减弱。在 2006年的考试中不仅会在原有话题的基础上增加部分新问题，而且会对于第二部分的topic(话题)进行具体化，例如原来只问holiday(假期)的话题，以后将会具体为highschool(高中)的毕业旅行。

　　专家提示：雅思口语在网络上有较全面的“机经”(考生对考试题目和答案的回忆)，考生可以把这些内容作为参考。而新托福口语考试，由于考生开始时间有差异，在同一个考场中可能会出现说话声音此起彼伏的情况。

　　阅读比较

　　新托福阅读部分内容变得更加学术化，其涵盖的题材也更加广泛，包括了历史、科学、教育、商业、社科、艺术文学、工程技术、体育文娱8个方面。此外，阅读部分还出现两种新题型：“插入句子题”和“拖动选择的多选题”。

　　雅思文章内容基本来自传统的题库，比如有关古代文明、移民史的社会科学话题，英国农业和动物特征介绍的自然科学话题等。新题的出现都比较有规律，如教育方面的科技英语(Scientific English)话题。阅读部分新题约占20%~30%。

　　专家提示：雅思阅读的“机经”只可以提供文章的背景信息，建议考生最好多花时间来熟悉真题和题型。

　　作文比较

　　新托福作文部分新增一篇考查综合能力的文章。要求考生用3分钟时间读一篇学术性文章，然后听2—3分钟的相关讲座的录音，最后要求考生在20分钟内写下一篇字数在150—225的短文章。大作文部分基本不变，字数比旧托福要求稍长。

　　雅思一大一小两篇作文，小作文话题中的各种常规图表、柱状图、线图、饼图等交替出现。大作文的话题出现比较全面，包括了政府、环境、科技、媒体、犯罪、文化、动物等各种争议性话题。

　　专家提示：不管是雅思还是新托福，考试中的大作文题都有全球范围内进行考题轮换的趋势，考生可以通过网上的“题库”，作为参考练习。

　　认可度比较

　　加拿大所有大学认可IELTS成绩，英国、爱尔兰、新西兰、荷兰等英联邦国家的院校优先认可IELTS 成绩;澳大利亚只接受IELTS成绩;法国、丹麦、芬兰等欧洲国家的英语授课项目也要求IELTS成绩。目前在美国有超过2000所院校接受IELTS成绩(此数字正不断增长)，如顶级的8所常春藤联盟院校全部接受IELTS成绩。“US News & World Report”公布的美国排名前一百三十位院校，有115所院校接受IELTS成绩，占总数的88.5%，在前五十位院校中有47所接受IELTS成绩，占94%。

　　0. 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。

　　1. 提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

　　2 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

　　3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

　　4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

　　5. 起酸碱度缓冲液作用。

　　6. 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

　　牛血清的主要成份

　　血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

　　1. 蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。纤维粘连素 细胞促进细胞附着;α2 巨球蛋白 抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白 促细胞附着;转铁蛋白 能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用。

　　2.多肽：血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员之一，是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。

　　3.激素：激素对细胞的作用是多方面的。

　　胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。

　　类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。促生长激素：促细胞增殖效应。

　　氢化可的松：血清中含有定量的该成分，它可能兼有促细胞贴附和增殖作用，但有人证明，血清中的氢化可的松，如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。

　　4其他成份：氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义