二、液相仪器基本构造及原理

1、高效液相仪的构成

高效液相色谱仪主要包括以下部件：溶剂瓶，溶剂瓶箱，在线脱气机，液相泵，（手动）自动进样器（六通阀），色谱柱，柱温箱，检测器。不同的配置可以有不同的模块（如自动进样器恒温器，二维色谱接不同类型检测器等）。

仪器如图示：

液相色谱管路流程为：

依次流程为：（溶剂瓶）流动相→脱气机→液相泵（混合器，阻尼器）→进样器→色谱柱→检测器→废液

2、在线脱气机

脱气机是对溶剂瓶中的流动相进行脱气的，主要包括部件真空泵，传感器，电磁阀，控制器，真空腔等。

主要部件包括以下几个（实物图）

CN、SW开关（调节到连续模式）

传感器

电磁阀

控制器

真空泵

真空腔

脱气机全图

5气路脱气示意图

　　应当注意以下几个问题：

　　(1)样品在流动相中最好是可溶的，如果可能的话，应当用流动相溶解样品，它可使色谱图中低k’段的虚假峰尽可能减少。

　　(2)选择合适的进样阀或注射器。一般说来只要选择适当，都能获得很好的重复性。在选择进样阀时，要考虑它应有较好的清洗条件，并能减少而不是加剧近样过程中通过柱和检测器的紊乱状态。无论使用进样阎还是注射器，部应当尽可能地减小结构和死体积。

　　(3) 为了位监控严密，应当尽可能地选用一种内标，尤其是在遇到复杂样品时，更应如此。

　　(4)如果是单独购买一种进样系统，则一定要保证联接用的固定装置和柱子上的固定装置相配。

在所有色谱技术中，液相色谱法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）发明的，但其初期发展比较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分 析法的主流。到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技 术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率 高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。
　　气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合 物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。现在，HPLC的应用范围已经远远超过 气相色谱，位居色谱法之首。

高效液相色谱的类型

　　广义地讲，固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相，也应归于液相 色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。

　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离 子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实，有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类。表8-1列举了一些液相色谱方法。按分离机理，有的相同或部分重叠。但这些方法或是在 应用对象上有独特之处，或是在分离过程上有所不同，通常被赋予了比较固定的名称。

表8-1 HPLC按分离机理的分类

类 型	主 要分离机理	主要分析对象或应用领域
吸附色谱	吸附能，氢键	异构体分离、族分离，制备
分配色谱	疏水分配作用	各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱	溶质分子大小	高分子分离，分子量及其分布的测定
离子交换色谱	库仑力	无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱	Donnan膜平衡	有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱	疏水分配作用	离子性物质分析
疏水作用色谱	疏水分配作用	蛋白质分离与纯化
手性色谱	立体效应	手性异构体分离，药物纯化
亲和色谱	生化特异亲和力	蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析

液相色谱仪流程图

　　现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合 起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗 脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。

　　液相色谱仪的工作 过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中 的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。