说到病毒，拿我们现在贼讨厌的新冠病毒COVID-19: SARS-coV-2来举例，它的遗传物质是RNA。如果SARS-CoV-2大流行给我们带来了任何启示，那么对RNA修饰的研究现在比以往任何时候都更加重要。 这是否意味着要研究病毒RNA本身以更多地了解不同的改变和表观遗传学变化如何使这些病毒更具弹性和更具感染力，或者研究从细胞和组织中收集的RNA以了解这些不同病原体对宿主细胞功能的影响，这项研究努力几乎是无尽的。RNA m6A的原理和概念我今日就不再赘述，今天就开门见山的聊聊病毒 RNA m6A.

一 m6A修饰对RNA病毒生命周期的影响

已知表观遗传修饰会影响人冠状病毒等RNA病毒的生命周期。据报道，像N6-甲基腺苷(m6A)这样的修饰腺苷通过调节病毒帽结构、病毒基因表达、病毒子代、先天性感应途径和先天性免疫反应来影响特定RNA病毒的生存能力。m6A的获得或丧失可导致RNA病毒发生显著的功能变化，改变宿主细胞的融合/进入、复制、传播、病原体强度和免疫逃避。宿主细胞的m6A表型组在宿主抵抗力中起着重要作用，病毒感染后也可发生改变。SARS-CoV-2基因组长度超过29800个核苷酸，根据RNA甲基化酶复合物METTL3/14对m6A修饰的特定序列座的存在，包括GGACU(T)、GGACA和GGACC，包含50多个潜在的m6A位点。因此，SARS-CoV-2 RNA中>0.64%的腺苷，或0.18%的碱基可能是m6A。因此，总RNA中m6A的定量和全转录组m6A图谱的绘制对于研究m6A相关的病毒功能和相应的机制，以及确定新的抗病毒治疗靶点至关重要。

二 病毒RNA提取

无论您是从细胞，组织还是病毒的样品开始，有效的RNA分离通常是成功进行实验的步。对于病毒：另一方面，当涉及病毒样品时，诸如病毒滴度低和污染性宿主核酸的高存在之类的挑战需要使用补充技术来确保产量和纯度符合下游要求。在我们zui近的公告文章中，我们概述了可以完成此操作的10种方法，因此您可以将其应用到zui适合您的学习的方法中。一种方法是接种细胞培养物进行病毒扩增，然后收集扩增的病毒体，以与EpiGentek的病毒RNA提取试剂盒一起使用。注意：对于直接从临床标本中提取的病毒RNA，在m6A RNA富集之前，需要额外的处理以去除共提取的宿主DNA和rRNA污染物。

三 病毒RNA提取试剂盒

病毒RNA提取产品我们主要有2种：RNA稳健的旋转柱和磁性试剂盒我们的每一个试剂盒都是为了提取高质量的RNA而设计的，除了用于RT-PCR之外，还可以用于其他下游应用。我们的试剂盒在提取方法以及通量选项（高/手动）的类型上有所不同，因此无论您的实验室需要什么，我们的试剂盒都可以帮助您获得随时可用的纯化病毒RNA。我们的各种磁珠和自旋柱试剂盒可以从不同的样品来源（鼻腔/鼻咽拭子、细胞/组织）和物种（病毒、哺乳动物）中分离RNA。洗涤剂和潮解盐用于裂解细胞和灭活RN酶。专门的高盐缓冲系统使RNA碱基与磁珠结合到自旋柱的玻璃纤维基质上，同时污染物被有效地洗去。纯核酸用水缓冲液洗脱，不需要苯酚提取或酒精沉淀。具体操作流程如下：

结果：

Abbexa热门产品研究：https://www.amyjet.com/brand/Abbexa.shtml

　　1.细胞培养：细胞培养条件为含有 10% 胎牛血清的培养液(根据不同的细胞选择合适的细胞培养液)，37℃下在含有 5% CO2 的培养箱中培养。

　　2.细胞冻存：细胞消化后收集， 1000rpm 离心 5min ，去上清，用 1ml 含有 10% DMSO的培养液重悬，逐级降温后转入-70℃冻存 24h，转入液氮中长期保存。

　　3.细胞复苏：将液氮中冻存的细胞取出， 37℃水浴中融化，取出后 1000rpm 离心 5min ，去上清，用培养液重悬后接入培养皿或培养瓶中培养。

　　4.细胞传代：对于贴壁细胞将培养皿或培养瓶中的培液吸干， 用灭过菌的 1×PBS 冲洗后加入一定量的 0.25% 胰酶消化，待镜下观察细胞变圆且还未漂起时，加入有血清的正常培液终止消化，吹打细胞成细胞悬液后将细胞接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。对于悬浮细胞可以直接传代也可以离心法传代。直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内， 1000rpm，5分钟，去除上清，加新的培养液到离心管内，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。

　　慧颖生物专业供应肝癌细胞hela细胞系稳定细胞系细胞株细胞 细胞系和细胞株悬浮细胞系构建稳转细胞系乳腺癌细胞系b细胞系肝癌细胞株胃癌细胞株细胞系和细胞株细胞株库白血病细胞株前列腺癌细胞株细胞株细胞系大鼠血管内皮细胞株宫颈癌细胞株atcc细胞株

　　一、基本设备

　　1、CO2培养箱或/和普通隔水式培养箱

　　2、超净工作台

　　3、无菌室

　　4、普通普微镜

　　5、电子显微镜

　　6、普通冰箱

　　7、低温冰箱

　　8、液氮罐

　　9、三重石英全玻璃蒸馏水器

　　10、水浴锅

　　11、高压灭菌器

　　12、水平式常速离心机

　　13、真空泵(负压过滤)

　　14、N2瓶(正压过滤)

　　15、血球计数板、计算器

　　16、定时器

　　17、可调和样器

　　18、紫外灯管

　　19、空调机(或排气扇)

　　20、隔离工作服、工作帽、口罩、拖鞋

　　21、普通药物天平(平衡用)

　　22、扭力天平

　　23、分析天平

　　24、酒精灯

　　二、基本器材

　　1、24孔培养板

　　2、96孔培养板

　　3、细胞培养瓶(25ml、50ml、110ml、150ml)

　　4、培养皿(￠6～9cm)

　　5、吸管(1ml、2ml、5ml、10ml)

　　6、滴管(弯头、直头、以弯头多用)

　　7、灭菌距器，G6型多用，常用直径100mm

　　8、抽滤瓶(1000ml、500ml、250ml三种)

　　9、不锈钢正压滤器(1000、2000ml为多用)

　　10、滤膜(直径10cm，孔径0.22μ、0.30μ为多用)

　　11、康氏管、刻度具塞离心管(10ml)

　　12、烧杯：100ml、500ml、100ml

　　13、量筒：1000ml、500ml、100ml

　　14、贮液瓶：250ml、500ml、100ml

　　15、小瓶：常用20ml、10ml、5ml

　　16、清洁液罐

　　17、各种规格毛刷

　　18、各种规格胶塞(唯00、000号多用)

　　19、各种规格吸球及吸头

　　20、剪刀、镊子(眼科镊子、中号镊子)

　　21、试管架

　　22、饭盒(大量)、菜盒(大量，均为铝质)

　　23、吸管筒(玻璃筒或铜质)

　　24、包装纸(多为牛皮纸)

　　25、冷冻细胞管或安瓶

　　26、脱脂棉、脱脂纱布、医用胶布

　　27、加样吸头

　　28、记号笔(多为进口防水笔、黑色更佳)

　　29、注射器(1.0、5.0、10ml为多用)

　　30、直径25mm微滤器

在我们所崇尚的所有事物中，只有科学可以“显灵”！

正如宇宙是从黑洞大爆炸一刻启始，生命则是从精子和卵子的碰撞一刻开始。对单个生命体来说，时间和空间也是从这一刻开始才有意义。此外就像宇宙包含有无数的星星及相应星系一样，单个人体所含有的细胞也可用天文数字进行计算，全身大约有1000兆个细胞（万万为亿，万亿为兆）。当然如果我们从大一点的角度考虑，人体是由206根骨头、600块肌肉组装而成，但人体绝不是这些肌肉或骨头的简单组合，另外它也含有十万根头发、三亿根肌纤维，而且光脑细胞所含有的信息就超过1000兆。从某种意义上说，生命有机体的复杂程度不亚于宇宙，而且具有一定的可比性，假如把宇宙比作一个有机生命体，那么细胞可以认为是单个的星球，而一个组织或器官则可以被看作是一个星系。我们知道每个星球有他自己的独特运行轨迹，细胞也一样，也有他自己的活动轨迹及相应的作用角色。

　　谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗? L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

　　GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定? GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。 什么培养基中可以省去加酚红?酚红在培养基中用作PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

　　研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，(特别是雌激素)。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。如何用台盼兰计数活细胞?用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色细胞是死细胞。

　　培养基中丙酮酸钠的作用是什么?丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么?二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。 室温下配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用时PH值是多少?缓冲液PH值随温度变化而变化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃，25℃，37℃时，不同PH值。 50mM Tris-HC 溶液在4℃，25℃，37℃时，不同PH值 4°C 25°C 37°C 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 9.3 9.4 8.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 如何从T25瓶中转移sf9细胞?能用胰蛋白酶消化吗?我们推荐使用脱落细胞的方法，此技术破坏性最小，生活力最高。通过使用巴斯德吸液管，让细胞上培养基流动。

　　作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。 胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞： 1. 去除培养基。 2. 用2ml 1xPBS(足以覆盖细胞表面)洗涤细胞，去除PBS。 3. 加入2ml 1x胰酶EDTA(恰好覆盖细胞表面)。 4. 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。 5. 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。(培养基中的FBS终止了胰酶的活性。) 6. 离心(1100rpm)沉淀细胞。去除培养基。 7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。 39.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少? 为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代?随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗?通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候计数时，都应该检查细胞活力。

　　如果超过95%的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。 贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，在放置几天后颜色变紫? 这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的 pH值(确定松开瓶口以保证气体交换)。 细胞培养基偶然被冻，可否继续使用?如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗?当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。

　　因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗?大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。为什么要在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液? 胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。保存血清最好的方法? 我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。如何解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。最好不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

　　为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

　　若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量! 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀? 有些胎牛血清产品没有预老化，储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。 如何避免沉淀物的产生? 我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作: (1)解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，非常容易产生沉淀物。 (2)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 (3)请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。 (4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 (5)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

　　体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。

　　一、营养成分

　　细胞对营养条件一般包括以下几个方面：

　　1 氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。此外还需要谷氨酰胺，它在细胞代谢过程中有重要作用，所含的氮是核酸中票令和嘧啶合成的来源，同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。

　　2 单糖：培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。

　　3 维生素：主要扮演辅酶、辅基的角色，必不可少。生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12都是培养基常有的成分。

　　4 无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠钾钙镁氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。

　　二、促生长因子及激素

　　越来越多的实验证实各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态(分化或未分化)具有十分重要的作用。有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。

　　三、渗透压

　　细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260-320mOsm/kg的范围都适宜。

　　四、pH

　　大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响，培养基应具一定的缓冲能力。造成pH波动主要是代谢产生的CO2，在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，培养基pH很快下降。为解决这一问题，合成培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统，并采用开放培养的方式，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，在通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%)，使之与培养基中的NaHCO3处于平衡状态。

　　五、无毒、无污染

　　体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有任何抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染(如细菌、真菌、支原体、病毒等)、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染(如抗体、补体)。对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。

2. 有时候文献不一定完整，如果你按照文献去做，后果？我曾经按照四面体的一篇文献做硝化反映，文献说是一个小时滴完，我就***正儿八经的想1h滴完，我都计算出一分钟滴多少滴，结果，炸了，***，害死我了，差点破相、改变我的人生观，原因是没有观察温度，温度几乎在5秒钟之内上升100度，不炸才怪，所以，按照文献做反应的时候，如有可能，多思考一下，可能文献写的比较简单，不妨做实验之前多研究讨论一下。

3. 切记不可逞能，如果是危险的，但是自己认为难度并不是很难的，自己一时逞能，结果可能会害了自己。我们实验室水泵经常发生问题，我们自己捣鼓捣鼓，也就不以为然，有一次我爬桌子修水泵，脚下一划，反正结果是小腿逢了三针，还不敢告诉老板，只是休息了半天，第二天腿以瘸一瘸的就去做实验了，那个，不是滋味，所以，做实验，一定要小心，不能逞能。

4. 做实验时，不能吹牛，有其是在记数据时，否则自己也不知道记些什么，实验白做。实验成功时不可得意忘形，因为这是很容易犯低级错误。配试剂时，PH值和水的质量往往是实验总是不能成功的原因。

5、用烧瓶加热回流提取质轻易飘浮的药材时，量比一般可以加的量要少些，不然药液沸腾时容易将药材冲到冷凝管，从而堵塞冷凝管下部，直接后果就是：砰！（血的教训~5555555~~~~）

6、实验时一定要常常注意观察。不能走开时间太长。

7、标签、记录千万要随时跟上，你认为一定能记得的东东，过两三天决对在九霄云外了。

8、玻璃管、冷凝管上套胶塞时，一定小心用力，不要用猛力，我身边有几个人因为这个导致手流血长流。

9.每一次错误后都要认真找原因，再没有找到原因前不要急着进行下一次试验。

10.错误发生后不要气急败坏，这样不利于吸取教训

11. 不知道大家都怎么配制、保存洗液，上次要用15L洗液，我就用了一个塑料盆，5L/次，第三次的时候因为硫酸加水里后总是降不下温来，手边又没有凳子，我就把盆放在新进的紫外的显示器箱子上了，过夜，第二天发现盆底掉了，显示器来了个“强酸浴”，我打的去修，搭档祝贺我说：幸亏用的是显示器啊，几百块而已，要是用那上万的主机……后来买了耐酸的工业用的塑料桶
所以说 万不可偷懒偷闲

我在实验室里的三件宝：笔、纸、签。
1、记号笔要随身带。烧瓶，烧杯等用一个编号一个，不要怕麻烦，一目了然，总比绞尽脑汁好。
2、纸最好小本，作一步写一步，有了灵感马上记下来。下班前往记录本上写。不要明日复明日。
3、签。有时记号笔写不了，或是需要保守最好贴上签，在本上记录好。日子长了总会有永不住的

实验室重要的仪器维护。
不要不出事就什么都好，仪器天天使就正常了，一但出事就不可想象了。
仪器到维修日了一定要叫专业人士，仔细检查。出现异常现象，声响，味道一定要好好观察，及时询问专业人士，切不可“自以为是”。
一句话实验室无小事。
小则费钱，大则生命。实在可怕!

三周前我将套在乳胶管上的一个三通玻璃管拔下来的时候,玻璃管裂了,手被划伤,伤口很深,还有碎玻璃碴在其中。请大家小心，做此类动作一定戴手套或垫白大衣。

做实验一定要做好记录，贴好标签。有的时候觉得自己记住了，偷个懒，结果一转眼就分不清楚了！有的用记号笔标记的，可是质量不过关，一不小心，遇有机试剂或者水就突然不见了，然后就对N个瓶子想啊想啊……

请注意午间或夜间电压、水压的变化　
本人曾做过一段时间的三甲苯的硝化反应，用的是浓硫酸和发烟硝酸，虽然是严格按照操作规程，且在加完硝化试剂让其继续加热搅拌趋于平稳后，我才离开实验室去吃中饭，但等吃完饭回去一看，通风橱内一片狼籍：里面的硝化物和酸全部被冲了出来，回流冷凝管也被折在了实验台上，所幸的是没有人受伤害。这其中的罪魁祸首是不稳定的电压：在中午时段关闭了许多仪器，使局部电压增高，导致加热装置在达到设定温度后还有一段后延，结果才酿成了这样的结果。所以，提请大家注意中午和夜晚电压的变化是否会对你的实验带来影响。此外，在夜晚进行回流反应时也请注意水压的变化，以前我也碰到过这样的情况，容易造成橡皮管冲出而漏水。

刚来这里不久,我也谈谈自己的一些惨痛经验吧!
首先实验服一定要合身,最好袖口有收紧!要不两个大袖摆很容易惹祸!曾在实习时,袖口挂到门把手,把师兄的一整盘玻璃仪器砸了,心里一直愧疚不已!
再就是离心时,离心管的塞子一定要配套,要不机器会"意见"很大,有一次,它罢了工,跟爆炸一样,把我和师兄辛苦几天的体内样品都毁了,痛心啊!所以切不可大意!

在用旋转蒸发仪蒸除溶剂时，一定要等压力稳定，溶剂蒸出时，人才能离开。特别是在蒸除象二氯甲烷这样的低沸点溶剂时，一定要注意保护，否则，终产物掉入水中，那才是欲哭无泪啊

出状况的是作为保护气的N2。连续72小时的反应在进行到第二日下午的时候，自认为一切都很稳定了，半小时的晚饭归来，发现溶剂全被吹干，还好处理及时没有发生严重事故，但我的反应啊彻底泡了汤，欲哭无泪。检查下来，氮气瓶的阀门出的问题，半瓶氮气一股脑儿的冲进反应器。
所以由阀门控制的一定要注意控制阀哦！

除了要注意贴好样品的标签以外，还应保证好样品有一个安全、稳定的放置，如存放在圆底烧瓶中的液体样品，有时一不小心，则可能前功尽弃、欲哭无泪。
标准磨口仪器，在使用完后，一定要及时拆卸，否则，时间一长，磨口则可能粘得很紧。

有一次，我做LiAlH4反应，除水。外用制冷剂，因为太大意，没用加料漏斗，结果LiAlH4漏出了，烧了起来。大家可能不会犯同样的错。
还有更惨痛的，做中试放大，几步之后，投料万余，有机溶剂提取前忘了酸化，结果可想而之，没提出多少碱。而母液也因为别人用桶，倒了！！！痛苦！
所以，不能太自以为是。

市售聚酰胺有一定的粒度规格，常用的为60-90目和80-100目，填料前一定要过筛分级。曾经一次用国产聚酰胺（80-100目）装填，事先没过筛，湿法和干法各上了一根柱，结果洗脱液洗不下来，是因为颗粒过细，将整根柱堵死了。于是将其过筛，80-100目只占了1/6，大部分是超细粉，超过120目。于是将筛出的80-100目的重新装填，洗脱液能顺利洗下。此外，装柱前只能辅一薄层脱脂棉，不能太厚，也不能压得过实，否则洗脱液也无法洗下。此外，填好柱后，顶部必须用滤低压住，勿用棉花。

其实有些东西是个人习惯问题，今天做实验时，要用大烧杯，看到实验台上放着一个，里面盛这点水样的东西，就顺手拿来用鼻子一嗅，顿时感觉失去了嗅觉，两眼流眼泪！这已经是第N次了，我想着今天把它写在丁香圆上，会改掉这个坏习惯(正确操作我想大家都知道），不然真要失去嗅觉了

1. 实验需要针对不同的试剂戴不同的手套，千万不能图方便。2. 一定在实验前检查好所用仪器。

减压蒸馏3教训：
1 接收瓶一定不能侥幸用锥形瓶。
后果——不堪重压，炸！！
2 做完立马拆装置。
后果——冷却后拆比登天还难；
3 别空悬锥形瓶。
后果——叮当！
擦桌子的重要性：
我的一个同学没擦净桌上的油，结果点燃了桌面，连带自己的衣袖！

提一点，开始做实验的时候，你也许不会忘记通水通电，拉真空。但是千万记得离开的时候要把水电关上，不管多晚都要跑一趟。否则，一早起来，实验室满地污水，费时劳神打扫还罢了，更重要的是老板对你还有好脸色？
用冷凝水的时候，千万记住把排空出口用抽气塞塞住，冷凝管要足够长，冷凝水要足够快，否则，溶剂蒸发完了哭都来不及。随时防备停水的可能，最好半小时看一趟，如果要离开的时候，拜托其他人照看一下，实验如果要过夜，最好是用容量大一些的热水泵打循环，不要开加热开关。或者干脆停了。
用玻璃仪器的时候，最好是买品牌货，比如可以向天玻或者是上海亚玻（我们最近向亚玻订购了一批。电话：021-66153169），否则，我自己下面的经历就会重演。我曾经在用真空水泵抽滤的时候，刚开始没事，但是等到真空度打到最大的时候，抽滤瓶（不知名品牌）爆了，通风橱里沾满了物料，几天的工作一下子全费了。而且，清理现场的工作，就用掉了一天的时间，至今，通风橱里还有当时的残料。而且，我们曾经向制作玻璃仪器的个体户订购过很多定做的仪器，虽然说东西是做出来了，但是在使用过程之中，问题不断。我自己做过统计，订购一百件仪器，能够正常使用到一个月的，不到40%。而且，不要相信他们先拿过来的样品，样品可能是他们请高手特制的，等大单子下了的时候，拿到手的就是他们自己制作的低劣货色了。举个例子，我们订购了50只抽气空心塞，结果，在一个月内，折断的的就是十几个，连带损失掉了一批四颈烧瓶和几天的工作成果。而且，明明在晚上开始实验的时候，一切正常。第二天早上，却看到四颈瓶居然被震断了，一切重头再来。现在，凡是没牌子的玻璃，我都不敢用了。其实，玻璃质量，完全可以用超声波来测试，通不过测试的，一律拒绝。奉劝各位老板，别光图省钱，做实验的人是容不得假的，人工浪费还是小事，很多好不容易得到的结果，随时可能错肩而过。