人类扭转蛋白A的基因克隆、表达与蛋白质纯化( I)———DYT1基因克隆与原核表达

上一篇 / 下一篇 2008-12-31 21:01:28/ 个人分类：蛋白质

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摘　要: 通过基因工程方法,用大肠杆菌原核表达系统表达人扭转蛋白A. 从该蛋白编码序列中设计引物,以人肝cDNA文库作模板扩增到编码该蛋白的基因片段. 将所得片段与pMDl8- T载体连接,转化到JMl09大肠杆菌中,从转化平板上挑出菌落,用碱裂解法提取质粒,通过PCR和酶切分析,筛选到阳性克隆,测序结果与文献报道结果一致. 提取质粒,用BamH I和Xho I酶切,回收目的片段,分别克隆到原核表达载体pET28a ( + )和pGEX-6P- 1中,转化JMl09受体菌,从JMl09受体菌中提出质粒,再转化到BL21 (DE3)菌中,筛选出阳性克隆,构建了人扭转蛋白A原核表达载体. IPTG诱导该工程菌,培养并离心收集. SDS- PAGE结果表明该蛋白在两种载体中均得到了高效表达.

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