应用蛋白质组学和RNAi 技术筛选鼻咽癌细胞中p53 功能相关蛋白质

摘要 为了阐明鼻咽癌中高表达的p53 蛋白聚集与失活的机制，高通量地检测与p53 功能相关的蛋白质，首先采用RNA 干扰(RNAi)技术稳定沉默鼻咽癌细胞系CNE2 的p53 基因表达，然后用蛋白质组技术研究稳定沉默该基因对鼻咽癌蛋白质表达谱的影响. 通过对稳定干扰p53 基因后鼻咽癌细胞系CNE2 的蛋白质表达谱改变的研究，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析和电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)验证鉴定了22 个差异表达蛋白质. 在这些差异表达蛋白质中，有些是已经报道的p53 功能相关蛋白质，如热休克蛋白27(HSP27)、异质性胞核核糖核蛋白K(hnRNPK)、14-3-3σ等，其他可能是新的p53 功能相关蛋白质，如eIF4B、TPT1、hnRNPH3、SFRS1 等. 部分差异表达蛋白质如HSP27、14-3-3σ和GRP75 经蛋白质印迹分析技术进行了验证，同时pcDNA3.1-FLAG-p53 质粒转染CNE2 细胞引起了HSP27、14-3-3σ表达下调，GRP75 表达上调. 在鼻咽癌细胞中鉴定的22 个差异表达蛋白质大致可以分为5类，包括信号传导相关蛋白质、分子伴侣、与转录和翻译相关蛋白质、代谢相关蛋白和细胞结构相关蛋白质，涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件，它们可能作为p53 功能相关蛋白质，为阐明鼻咽癌中p53 蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.