小鼠艾滋病动物模型的建立研究

构建动物模型是进行疾病的发病机制、药物治疗和疫苗研究的必需条件之一，艾滋病免疫动物模型为研发治疗艾滋病的药物提供了合适的模型，在艾滋病的研究中也占有重要地位。由于某些大动物的来源不容易，且费用较高、使用不方便等原因，因此采用小鼠作为感染性疾病研究的动物模型备受医药研发学者的重视。

由于鼠与人之间存在种属差异，利用普通动物模型得到的实验结果有时不能在人体上适用。带有功能性的人类基因、细胞或组织的人源化小鼠模型通常被用于人类疾病体内研究的活体替代模型，大大提高了模拟人类某些疾病的有效性。我国有研究者利用环孢菌素A制备了艾滋病的免疫动物模型。

人类免疫缺陷病毒HIV是一种逆转录病毒慢病毒属中的灵长免疫缺陷病毒亚属，其传播途径主要包括血液传播和母婴传播等，感染后引起的临床表现十分复杂，以CD4⁺T淋巴细胞进行性减少和免疫缺陷为特征，常伴有实质器官，如脑、淋巴结和肺等的炎性疾病、神经障碍和恶性肿瘤。在泰国进行的艾滋病疫苗RV144在临床前动物实验和三期临床实验结果显示，该疫苗已成为人类艾滋病研究史上首个对接种疫苗者起到一定保护作用的艾滋病疫苗。有研究者构建了用于研究RV144艾滋病疫苗的人源化小鼠这一动物模型。

1、环孢菌素A制备免疫缺陷动物模型的研究

环孢菌素A是临床上广泛应用的一种免疫抑制剂，主要用于自身免疫性疾病和抑制排斥反应的防治。它能选择性地阻断依赖Th细胞的免疫应答，对B细胞、粒细胞及巨噬细胞的影响较小，因为可为建立艾滋病免疫动物模型提供了契机。

探讨环孢菌素A制备免疫缺陷动物模型的方法与效果，为中医药防治艾滋病的实验研究提供合适的模型^[1]。在小鼠腹腔注射环孢菌素A，注射量为25mg/kg.d，隔天一次，共3次。通过观察动物的一般症状和脾脏、胸腺、肺组织病理变化，并检测动物脾脏重量指数、胸腺重量指数、外周血CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群百分率，综合评价免疫缺陷动物模型。

结果与正常对照组比较，动物模型组出现反应迟钝，毛失光泽等一般症状，胸腺重量指数下降，CD4⁺T细胞百分率明显减少，CD8⁺T细胞百分率增高，胸腺组织萎缩、出现局部脂肪变性，肺脏有局灶性肺泡壁增厚、部分肺泡扩大。因此环孢菌素A可以成功诱导以CD4⁺T细胞减少为主要特征的免疫缺陷，可以建立符合HIV主要致病特点的动物模型。

2、艾滋病人源化小鼠动物模型构建

人源化小鼠的诞生使得利用动物体来代替人体研究HIV变得可能，有研究者旨在根据已知方法构建NOD/SCID BLT人源化小鼠，且测试其在接种RV144艾滋病疫苗后，是否能在体内产生特异性的免疫反应^[2]。只有确定该人源化小鼠模型构建成功，其体内含有人类淋巴细胞，并且在接种RV144艾滋病疫苗后能产生争对HIV-1抗原的特异性免疫反应，才能用该动物模型对RV144艾滋病疫苗进行更深入的研究。

该实验向NOD/SCID免疫缺陷型小鼠肾包膜内移植入人类胎儿肝脏和胸腺组织，并同时向静脉内注射与移植的组织同源的CD34+HSCs，通过流式细胞术检测到重组小鼠体内携带有的人类CD45⁺淋巴细胞占小鼠血液中总的CD45⁺淋巴细胞的88%以上，这一结果说明人源化小鼠模型已构建成功。向人源化小鼠接种RV144艾滋病疫苗，并且利用ELISA以及western印迹分析法检测到体内产生的病毒特异性抗体，表明该艾滋病疫苗确实可以在人源化小鼠体内成功诱导产生HIV-1特异性的体液免疫反应。

该实验利用已经被HIV-1感染的人源化小鼠的PBMCs进行细胞胞内因子染色。其实验结果显示，该细胞胞内因子染色法实验系统建立成功，可用于检测RV144艾滋病疫苗是否在人源化小鼠体内诱导产生了细胞免疫。综上，该实验成功的构建了可用于研究RV144艾滋病疫苗的人源化小鼠这一动物模型，并且对小鼠接种该疫苗的时间和剂量给出了参考，也初步检测到该艾滋病疫苗在小鼠体内诱导产生了体液免疫反应，为进一步利用该动物模型进行RV144艾滋病疫苗研究奠定了基础。

免疫动物模型可以采用一些化学免疫抑制剂如环磷酰胺、氢化可的松、地塞米松、环保菌素A、放线菌素和长春新碱等进行制备。研究表明，采用环保菌素A制备的小鼠免疫缺陷动物模型符合HIV致病机制。而构建可用于研究RV144艾滋病疫苗的人源化小鼠动物模型，并且对小鼠接种该疫苗的时间和剂量给出了参考，为该疫苗的研究提供了研究基础。

[1]应用环孢菌素A制备小鼠免疫缺陷动物模型[J].

[2]人源化小鼠模型的建立及其用于RV144艾滋病疫苗研究的可行性分析[J].