杂质的结构确证在药物研发中的作用

众所周知，在药物的研发和生产过程中，杂质的控制是事关药物质量的关键事项，其中杂质的结构确证对药物质量控制和药物合成工艺及生产工艺的改进具有重要的作用。结构确证是指采用物理或者化学的方法对所制得的化合物进行结构分析，根据得到的数据和结构信息推论或者验证化合物的结构。结构确证研究是药物研发的基础，是保证药学其他方面的研究、药理毒理和临床研究能否顺利进行的决定性因素。

合成路线也为化学结构的确证提供了进一步的线索。美国FDA关于原料药制备工艺的指导原则就指出，最终产物分子是如何从起始原料反应而生产的，以及合成过程中对各步反应变化的描述，都有助于对结构分析数据的解析和确证。如一种产物最终立体构型可能与起始原料有关，也可能是通过立体专属性反应得到的，或是通过合成中间体的拆分得到的，对合成路线的了解将为我们判断哪一种可能性是正确的提供依据。

研究复方盐酸替利定口服液主要杂质的结构和产生的原因，提高复方替利定口服液的质量^[1]。方法是通过LC-MS、IR和H-NMR检测分析其可能的结构并通过分离、合成等方法对杂质结构进行确认，从而在药物合成工艺上作出相应改进，减少杂质的含量。结果按照选定方法，获得复方盐酸替利定口服液三个主要杂质(顺式替利定、反式去甲替利定和顺式去甲替利定)，并与LC-MS、IR、H-NMR结果一一对应。以此依据在合成工艺方面做出了相应改进，减少了盐酸替利定原料杂质的含量，从而提高了复方替利定口服液的质量。研究发现该研究提高了盐酸替利定原料的纯度，进一步对提高复方盐酸替利定口服液的质量具有一定价值。

药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质为杂质。杂质分析方法的选择直接关系到杂质测定结果的专属性与准确性，因此，在进行杂质研究时首要问题是选择合适的杂质分析方法。美迪西的分析化学和纯化分离团队为客户提供高质量的分析和纯化分离服务，可以利用HPLC等各种技术分离监管起始原料、中间体、API和药物产品中的杂质，并采集完整的1D/2D NMR、LCMS、EA、HRMS、IR、UV等数据，对分离出来的杂质进行结构鉴定等。

总之对推测出的杂质结构，可以通过以下方式进一步对结构进行确证。

（1）根据质谱推断的结果，寻找相应的对照品、杂质定位液进行比对；

（2）若无对照品、杂质定位液，对于相对稳定的降解杂质，可以通过半制备法，制备少量的目标杂质，用微量核磁管，采用较高分辨率的核磁光谱仪进行结构确证；

（3）对于无法通过半制备方法获得的降解杂质，可以通过降解反应，提高该杂质的含量，然后通过一些技术测定其核磁数据，进行结构确证。

如有研究者通过破坏试验，追踪吉非替尼的降解产物，并对氧化杂质进行合成和定性定量分析^[2]。其结构经 1 H NMR、13C NMR和MS确证为4-[（3-氯-4-氟）苯胺基]-6-[3-（吗啉-4-基）丙氧基]-7-甲氧基-1-氧代喹唑啉（氧化杂质A）。通过调节流动相配比和pH值，建立了特异性检测吉非替尼片中氧化杂质的HPLC条件。使用C18色谱柱，以乙腈∶1%乙酸铵溶液（用冰乙酸调至p H 6.0）（38∶62）为流动相，检测波长253 nm。氧化杂质A在0.52.0μg/ml范围内线性关系良好，定量限为0.15μg/ml。研究发现该法能高效准确地测定吉非替尼片中的氧化杂质含量，可为其质量标准的建立提供参考。

杂质指的是在原料药的制备过程中，由原料、试剂、溶剂或副反应引入的与终产品结构不同的任何成分。杂质与药品的质量、安全和稳定性密切相关，对药物中的杂质进行制备和结构确证可以帮助了解杂质产生的途径，为药物合成工艺路线和生产工艺的改进提供依据，因而至关重要。

[1] 复方盐酸替利定口服液中主要杂质的结构确证与工艺改进[J].

[2] 吉非替尼片中氧化杂质的结构确证及HPLC法测定[J].