人肺表面活性物质相关蛋白A1 基因在大肠杆菌中的表达及产物的分离纯化

【摘要】　目的　研究人肺表面活性物质相关蛋白A1 (SP2A1) 在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法　将人SP2A1 基因克隆至表达载体pGEX22T 上,分别转化至大肠杆菌JM101、JM105、JM109、XL12blue 和BL21(DE3) 等不同宿主,并在不同温度中的表达,采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白,用ELISA 及Westert blot 初步分析SP2A1 蛋白的免疫原性,融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果　SP2A1 基因在前4 种宿主中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质,目的蛋白质分别占总蛋白的617 %、918 %、913 %、1418 %;于28 ℃时,该基因在BL21(DE3) 宿主中表达产物均为完整蛋白质,占总蛋白质的10 %。经包涵体纯化和Glutathione Sepharose 4B 亲和层析纯化,可获得纯度达95 %以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP2A 多克隆抗体特异识别,凝血酶作用后可切出相对分子质量为26 000的目的蛋白质片段。结论　人组织特异性蛋白质SP2A1 可在大肠杆菌中表达,表达产物具有良好的免疫原性。