蛋白质水力学半径的测定及用于蛋白质变性过程的实时监控

摘要: 采用纳米粒度分析仪Zetasizer Nano 测定了牛血清白蛋白(BSA) 的水力学半径, 考察了p H、离子强度、表面活性剂等的影响, 并用于BSA 热变性和脲变性过程的实时跟踪。随p H 增大, BSA 水力学半径呈“U”形变化趋势; 酸性条件下, 分子膨胀, 随着盐浓度升高, BSA 分子先小幅减小后显著增大; 中性p H 范围, 离子强度对蛋白质分子尺寸影响很小, 蛋白质性质相对稳定。离子型表面活性剂在蛋白质表面吸附, 从而影响BSA水力学半径。通过水力学半径的测量实时跟踪蛋白质变性过程的分子变化, 发现增加热变性中离子强度可加快变性速率, SDS 加入增大了BSA 变性温度Tm 。脲在促使BSA 分子扩张的同时, 对链伸展有抑制作用; 在DTT存在下, BSA 的水力学半径随着时间变化逐渐增大。结果表明, 简便的水力学半径测量可以用于蛋白质大小的表征, 并可实时跟踪蛋白变性过程的分子尺度变化。