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核酸与蛋白测试原理
蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在280nm波长处,且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系,故可作为蛋白质定性、定量测定的依据,正因为如此,280nm处的紫外吸收法通常被用于层析系统中蛋白质浓度的连续监控。但由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要准确定量,必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较,或且已经知道其消光系数作为参考。另外,不少非蛋白物质在280nm波长下也有—定吸收能力,可能发生干扰。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶碱)的影响更为严重。在280nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在254nm处的吸收更强,其吸收高峰在254nm附近。核酸254nm处的消光系数是280nm处的2倍,而蛋白质则相反,280nm紫外吸收值大于254nm的吸收值。通常:
纯蛋白质的光吸收比值:A280/A254 >> 1.8
纯核酸的光吸收比值: A280/A254 << 0.5
因此蛋白质溶液中同时存在核酸时(生物体系大多数如此),必须同时测定OD254nm,与OD280nm。然后根据两种波长的吸收度的比值,通过经验公式校正,以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。
蛋白质浓度=1.45×A280-0.74×A254 (mg/ml)
此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所测定的数据来建立的。
适用范围:
生物化学、合成化学、天然产物、药物开发、食品化学、农业化学、化妆品、聚合物与石化等行业的科研与制备。可进行离子交换层析、亲和层析 凝胶过滤层析、疏水作用层析等方法,用于 蛋白质、酶、核酸、核苷酸、多肽、(含/不含芳香族氨基酸)及其它任何有紫外吸收的生物/非生物样品的分离分析、流动检测,是生物分子纯化的理想选择,它具有功能多,使用简便,经济等特点。小巧的设计,zei大限度地节约冷库和实验室的空间
| GAS系列中压层析系统技术指标 |
1、多波长紫 外检测仪 (高性能双光束) | ★波长范围:214nm、220nm、254nm.280nm、340nm、365nm 备注:(MJ光源波长214nm---400nm AT光源254nm、280nm---400nml两种光源中用户可根据需求选配,zei多可选配6个波长) 显示吸光度值。 基线噪声:2×10-5AU(240nm,室温) 基线漂移:15×10-5AU(240nm,室温) zei小检出浓度:5×10-7g/mL(254nm,萘标,甲醇流动相,室温) USB接口,6种分析方法,进行数据分析与计算 |
全波长紫外检测仪 (可选配) | 1、波长范围:190nm~740nm、步长 1 nm。 2、带 宽: 8nm 3、波长精度:±1nm 4、灵敏度< 2x 10-5 AU(254nm 时),时间常数 1.0 s。 5、噪声:2×10-5AU(254nm@1mL/min@甲醇) 6、漂移:15×10-5AU/h(254nm@1mL/min@甲醇) 7、zei小检测浓度:5×10-9g/mL(254nm@1mL/min@甲醇@萘标) 8、测量范围:0~2AU 9、显示:LCD 2×16英文显示 10、制备池: 光程: 10mm 容积:30ul 流量:0~50ml/min。 材料:316L不锈钢,石英玻璃。管路不锈钢毛细管 • 主要特点 ◎该仪器采用全数字输出设计。信号经24位A/D后由单片机完成对数转 换及调零处理,处理后结果到RS232接口。 ◎该仪器可对波长进行编成控制。 ◎该仪器可实施停流自动光谱扫描。扫描速度: 波长1 中压制备层析系统信息由上海金达生化仪器有限公司为您提供,如您想了解更多关于中压制备层析系统报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。 注:该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案,不可用于临床诊断或治疗等相关用途 请扫描二维码查看详细参数
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