SILAC 蛋白质组学技术

SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，这种方法首先是由2002年丹麦Mann的实验室对AACT技术做了进一步改进而获得的，他们首次应用于定量蛋白质组研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂细胞蛋白质组提供了有效的方案。

技术原理

SILAC的基本原理是分别用天然同位素（轻型）或稳定同位素（重型）标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经>6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中取代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。

技术优势

• 采用高分辨率质谱定量技术，定量结果准确且批次变异小、重复性好；

• Silac标记是在样品处理前引入，随后进行蛋白质分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响一致，误差减少；

• Silac与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白质性质影响；

• Silac属于体内标记，标记效率高且稳定，不仅适合于进行全细胞蛋白质的分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量。

应用领域

• 基础医学、临床诊断：生物标志物，疾病机理机制，疾病分型，个性化治疗等；

• 生物医药：药物作用机理，药效评价，药物开发等；

样品要求

• 组织类型：动物组织≥100mg、植物组织≥100mg、微生物≥20mg；

• 细胞样品：每样品细胞量 ≥ 1X10⁷

• 蛋白提取物：≥100µg

• 体液：血清/血浆≥200µL、尿液≥1ml、唾液/脑脊液≥1ml、泪液≥1mL、支气管灌洗液≥3ml；

• 外泌体：≥10µL

• FFPE石蜡包埋切片：≥0.3 mm * 0.3 mm

参考文献

[1]. Kim JY, Welsh EA, et al. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. Proc Natl Acad Sci USA. 2013; 110(30): 12414-9.

[2]. Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun. 2014; 5: 3319.

[3]. Ravikumar V, Shi L, et al. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics. 2014 Jan 5.

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途