超氧化物岐化酶(SOD)的应用方案

超氧化物岐化酶(SOD)的应用方案(三氮蓝四唑NBT法测定)

引言：

SOD是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SOD:Mn-SOD和Cu.Zn-SOD，它们都催化下列反应:由于超氧自由基(02)为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子02-..-，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲躜(黄色)，继而还原生成二甲躜，它是一种蓝色物质，在560nm波长下有最大吸收。当加入SOD时，可以使超氧自由基与H结合生成H2O2和02，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲攒生成速度减慢。通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照--定时间后测定560nm波长下各液光密度值，抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比。反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低。