Pyrosequencing甲基化检测服务

焦磷酸测序技术（Pyrosequencing）作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频率，对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测，为甲基化研究提供了新的途径。上海伯豪为您提供基于QIAGEN公司焦磷酸测序平台的服务。

一、焦磷酸测序技术原理

焦磷酸测序技术是由4种酶（DNA 聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。具体过程如下：

1.仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP)
2.互补的碱基结合在模板上时，会释放出焦磷酸基团Pyrophosphate (PPi)
3.PPi在ATP硫酸化酶(ATP Sulfurylase)作用下，合成ATP，ATP作为能量分子，驱动荧光素在荧光素酶(Luciferase)的催化下转化为氧化荧光素，并发出与ATP能量成正比的荧光信号
4.信号被CCD数码相机捕捉，形成峰形PyrogramTM
5.未与模板结合的碱基将被三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)降解
6.加入下一种dNTP

二、焦磷酸测序实验流程

三、焦磷酸测序在DNA甲基化中的应用

1.基因组整体水平的甲基化检测
2.特异位点的甲基化检测
3.寻找新的甲基化位点

四、焦磷酸测序结果展示

五、 案例分析


焦磷酸测序检测宫颈癌中UTF1启动子区域甲基化水平

研究者利用Illumina HumanMethylation27芯片对9例样本（4例正常，5例宫颈癌）进行全基因组启动子区甲基化扫描，结果显示宫颈癌患者UTF1启动子区域呈现出高的甲基化状态。为了验证芯片筛选的结果，采用焦磷酸测序方法首先对这些样本的UTF1启动子区域进行深入分析，结果表明正常宫颈中UTF1启动子区域呈现低甲基化状态，而相同的位点在SCC中呈现高甲基化状态。为了进一步验证，研究者扩大样本量，对47例不同类型的石蜡包埋组织样本及10例白细胞进行焦磷酸测序检测，与之前的结论保持一致。结合RNA水平和蛋白水平的实验，研究者最后提出UTF1启动子甲基化状态可以作为宫颈癌诊断的一个重要的分子标志物。


原文：Aberrant Promoter Methylation and Expression of UTF1 during Cervical Carcinogenesi. Plos One. 2012 ,7(8):e42704.

Pyrosequencing甲基化检测服务信息由上海伯豪生物技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于Pyrosequencing甲基化检测服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途