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将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记,试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后,测定复合物中的荧光素,这种免疫技术,称为免疫荧光素技术。
常见荧光素:
⑴ FITC
⑵ RB200
⑶ TRITC
⑷ 镧系:Eu、Tb
⑸ PE
⑹ 其它
实验步骤:
1. 4μm石蜡切,60℃烤,30min。
2. 常规脱蜡至水(二甲***Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min,无水乙醇,95%乙醇,85%乙醇,75%乙醇各2min)。
3. PBS洗(***酸盐缓冲液0.01mol/L pH7.4)3×3min。
4. 0.1%胰蛋白酶(100ml蒸馏水中加入100mg胰蛋白酶,100mg氯化钙,用0.1N NaoH调pH至7.6),37℃,消化30min。(或其他修***法)
5. 0.01mol/L pH7.4 PBS洗3×3min。
6. 兔抗人AFP1:50(用专用抗体稀释液稀释)37℃,1h或室温4h,或4℃过夜。
7. PBS洗3×3min。
8. 羊抗兔IgG-F,1:20稀释,37℃,1h,室温2h。
9. PBS洗3×3min。
10.蒸馏水洗3min。
11.pH9.0缓冲甘油封片。
12.镜检,阳性呈明亮绿色荧光。
荧光信号增强封片剂
mowiol 40-88 4.8g
甘油 12ml
蒸馏水 12ml
0.2mol/L Tris(pH8.5) 24ml
上述混合(加热溶解),5000g离心,15min,zei后加入1.4-diazobicydo-[2,2,2]-octane(DABcos),终浓度2.5%(约1.25g),溶解后,分装存于-20℃中。
实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜,请联系嘉美生物。
实验预约热线:400-698-4168 010-58464308 010-58464306
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