激光共聚焦实验服务案例介绍

 XXXX原代细胞干预培养与激光共聚焦蛋白细胞定位实验

实验试剂：PBS(***酸盐缓冲液pH7.4)（实验室常规配置）；非免疫山羊血清；Triton X-100（sigma）；BSA抗体稀释液（实验室常规配置）；A蛋白抗体（Santa cruz）；B蛋白抗体（Abcam）；Alexa Fluor® 488 donkey anti-goat IgG (H+L)(Invitrogen)；Alexa Fluor® 555 Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment(Invitrogen)
上述试剂均由嘉美生物代买。

实验仪器：激光共聚焦扫描显微镜(LeicaTCS-SP5型)

实验步骤：将细胞每孔2ml（密度为2*10⁶/L）传至激光共聚焦专用培养皿；接种24h后，采用刺激物处理；25min后培养皿内细胞培养液，PBS冲洗3次，2-4%甲醛固定15min；1×PBS缓冲液（0.01M，pH7.4）洗涤3次，每次5min，滴加非免疫山羊血清（内含0.3%Triton X-100）封闭液,覆盖液面2-3mm，室温放置60min，除去多余液体；加A蛋白一抗50μL（1:100），4℃下过夜；PBS洗3次，每次5min，加荧光标记的A蛋白二抗 [Alexa Fluor® 488 donkey anti-goat IgG (H+L)] 50μL（1:200），室温下放置60min；PBS冲洗3次，加B蛋白一抗50μL（1:500）37℃下放置1h，PBS洗3次，每次5min；加荧光标记的B蛋白二抗[(Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment)] 50μL（1:200），置于室温下60 min；PBS洗3次，每次5min；激光共聚焦显微镜下观察、拍照，每组照相2张，用MOTIC FLUO1.0生物荧光分析处理软件将图片进行量化。
实验分组：刺激物分4组。培养液中刺激物的终浓度：刺激物L0.5ng/ml；刺激物S20nM；刺激时间25分钟
1组：control（DMEM培养液）
2组：刺激物L 
3组：刺激物S  
4组：刺激物L+S

实验结果：

1组：control（DMEM培养液）

2组：刺激物L

3组：刺激物S

嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,***酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途