microRNA实时定量PCR检测服务

实时荧光定量PCR技术是在普通PCR反应体系中加入荧光试剂，利用荧光信号实时检测PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。成熟miRNA是由21-25个核苷酸组成的小RNA，由于长度太短，不能通过传统的实时定量PCR进行检测。本公司通过特殊设计的茎环结构的反转录引物，配合实时定量PCR引物及探针可以精确检测微量样品中miRNA表达水平，也可以用终点PCR法定性检测。

英拜为您提供miRNA 实时定量PCR技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，本公司专业的技术服务人员就可替您完成miRNA实时定量PCR实验操作和数据分析，提供给您完整的实验报告，为您节省大量的时间和精力。
 
miRNA实时定量PCR技术服务流程如下：

    miRNA实时荧光PCR原理图           

1.     引物设计、合成
设计并合成目的miRNA的茎环RT引物、PCR引物和检测用荧光探针，并合成该miRNA相应的DNA寡核苷酸作为标准。
2.     样品RNA抽提
a．组织样品：取适量（50～100mg）新鲜组织或正确保存的组织样品，匀浆后用PURELINKTM试剂抽提RNA。
b．细胞样品：取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，吸去PBS后用PURELINKTM试剂抽提RNA。
3.     RNA质量检测
a． 紫外吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值，获得RNA的浓度并通过A260/280及A260/230的吸收比值判断RNA的纯度。
b． 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA纯度和完整性。
注：用于miRNA实时定量PCR检测的RNA样品，必须高纯度、完整，没有RNase 污染（降解的样品不能用于实时定量PCR检测），同时提取方法必须保证所得样品包含完整的小RNA部分。
4.     逆转录合成cDNA
利用茎环引物逆转录合成cDNA第一链。
5.     实时定量PCR
以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增，梯度稀释的标准同时进行实时定量PCR扩增，根据Ct值制备标准曲线。以同样的方法测定每个样品中U6 snRNA含量作为内参.
  6.   分析结果、提供实验报告
  分析实时定量PCR结果，根据标准曲线定量样品中的目的miRNA。提供实验报告，包括详细的实验方法，实时定量PCR实验数据和图表。
   
 

microRNA实时定量PCR信息由上海英拜生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于microRNA实时定量PCR报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途