miRNA整体解决方案

一   miRNA表达研究

定量检测组织或细胞样本中的miRNA是功能研究的第一步，有助于人们进一步了解 miRNA与疾病发生及发展的关系，以便为疾病的早期诊断提供新的思路。本公司主要通过microRNA芯片、microRNA-Seq、microRNA PCR 芯片、实时定量PCR、原位杂交等多种方法检测miRNA的表达情况。为您提供zei优质的、全方位的技术服务。

1、micro RNA-seq ：

小RNA是一类重要的体内调节分子，主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是诱导基因沉默，参与基因转录后调控，从而调节细胞生长、分化，以及个体发育、生殖等重要生物学过程。小RNA测序技术采用胶分离技术，收集样品中18-30nt的RNA片段，利用高通量测序技术，一次性获得单碱基分辨率的数百万条小RNA序列信息，依托强大的生物信息分析平台，鉴定已知小RNA，并预测新的小RNA及其靶标基因。

2、 表达谱芯片：

英拜生物为您提供全基因组表达谱芯片技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，英拜的芯片技术服务人员就可为您完成全部实验操作，并提供完整的实验报告。同时，根据您的研究需要，英拜还提供基因网络关系分析、分子标志物筛选分析等数据挖掘服务。

英拜生物全基因组表达谱芯片主要实验流程
1. 样品RNA抽提：
2.  RNA质量检测：
3. cDNA/aRNA样品合成和标记
4. 标记效率质量检测：
5. 芯片杂交：

6. 图像采集和数据分析：
7. 提供实验报告 包括详细的实验方法以及芯片实验数据和图表。

3、microRNA实时定量PCR检测服务

实时荧光定量PCR技术是在普通PCR反应体系中加入荧光试剂，利用荧光信号实时检测PCR进程，zei后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。成熟miRNA是由21-25个核苷酸组成的小RNA，由于长度太短，不能通过传统的实时定量PCR进行检测。本公司通过特殊设计的茎环结构的反转录引物，配合实时定量PCR引物及探针可以精确检测微量样品中miRNA表达水平，也可以用终点PCR法定性检测。

本公司为您提供miRNA 实时定量PCR技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，本公司专业的技术服务人员就可替您完成miRNA实时定量PCR实验操作和数据分析，提供给您完整的实验报告，为您节省大量的时间和精力。

4、microRNA原位杂交
RNA原位核酸杂交(RNA nucleic acid hybridization in situ)又称RNA原位杂交(RNA in situ hybridization RISH)。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的RNA核苷酸片段，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交)，所形成的杂交体(Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的RNA分子。现在探针标记技术有生物素、地高辛、碱性***酸酶、辣根过氧化酶和荧光素。

二、靶基因预测及验证

1、miRNA芯片，microRNA-Seq数据深度发掘分析

a) 芯片，测序数据聚类分析

b) microRNA靶基因预测“TargetScanS”， “miRanda (miRBase)”，“miRGen”等数据库

预测差异microRNA的所有靶基因。

c) 靶基因GO分析

根据Gene Ontology数据库对靶基因进行功能显著分析，从而筛选显著性功能的靶基因。

d) 靶基因pathway分析

根据KEGG数据库对靶基因进行Pathway分类，并进行显著性分析从而得到显著性的Pathway分类。

e) 构建的MicroRNA与基因的调控网络

通过构建MicroRNA与基因的调控网络，可以从中找出hub基因及hub microRNA.

f) microRNA 、靶基因、转录因子调控网络

microRNA也会受到转录因子调控造成表达差异，通过系统研究转录因子与基因间的调控关系，可以为寻找重要转录因子及重要基因提供线索。

g) microRNA启动子分析及甲基化位点分析

当microRNA研究日趋火热，越来越多的研究者开始关注microRNA本身甲基化变化。MicroRNA基因的甲基化变化也是造成microRNA表达差异的重要原因。

2、microRNA 靶基因验证实验　

当前，microRNA对靶基因的功能研究十分热门。利用荧光素酶报告基因检测实验寻找或验证microRNA对靶点作用性是不可或缺的实验技术。英拜生物可为您提供microRNA报告基因载体构建服务，并可进一步为您提供荧光素酶报告基因检测实验服务。您只需要提供目的microRNA靶位点序列，本公司专业技术服务人员就可替您完成载体构建，为您节省大量的时间和精力。

下图为microRNA-reporter载体表达框架示意图，具有多克隆位点，方便插入目的靶点序列。psiCHECK-2载体用于终点法的细胞裂解物检测，包含萤火虫荧光素酶基因，使海肾荧光素酶的表达水平归一化，令该系统更可靠、重现性更好。使用psiCHECK-2载体时，无须通过共转染进行归一化。
        

 
英拜生物microRNA报告基因实验流程：

microRNA靶点的预测

利用Targetscan,miRanda,PicTar软件得到目的microRNA的预测靶点序列(客户提供)。

获得microRNA

miRNA整套技术服务靶基因功能验证服务信息由上海英拜生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于miRNA整套技术服务靶基因功能验证服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途