病毒包装

Cyagen目前提供慢病毒、腺病毒、腺相关病毒载体构建与病毒包装服务。您可以根据实验需要，选择合适的病毒包装系统。 

一、慢病毒包装

赛业生物采用第3代重组慢病毒包装系统制备病毒颗粒。为了增加慢病毒的安全性能，病毒制备所必需的元件序列被拆分到4个质粒当中，分别是：

1）1个编码目的基因的慢病毒转移质粒。目的基因两侧各有一个LTR（long terminal repeat）序列，LTR序列促使目的基因整合到目的细胞基因组里。为了提高安全性能，转移质粒的3’ LTR缺失了部分序列，使得整合后的病毒基因组失去自我复制能力。
2）2个包装质粒。其中一个质粒编码Rev, 另外一个质粒编码Gag和Pol。
3）1个编码包膜蛋白的质粒。

利用上述质粒包装出来的重组慢病毒颗粒，被称为自我失活VSV-G假型慢病毒（self-inactivating VSV-G pseudotyped lentivirus）。

每次包装重组慢病毒，包装质粒和编码包膜蛋白的质粒都是固定不变的，变的是编码目的基因的转移质粒。因此，您需要设计的是转移质粒。登陆www.vectorbuilder.com即可轻松快捷设计转移质粒！

首先将转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒转染到293T细胞。更换新鲜的培养基后，继续培养48～72小时。收集培养液，进行离心浓缩后，就可得到转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的超纯病毒颗粒，可以利用蔗糖超速离心进一步去除杂质，从而获得纯度更高的病毒颗粒。

二、CRISPR慢病毒包装

CRISPR/Cas9慢病毒系统可对基因组的特定位点进行精确编辑。其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA(guide RNA,gRNA)识别特定基因组位点并对双链DNA进行切割，从而实现细胞水平单基因或多基因敲除。CRISPR慢病毒缩短实验周期的同时，更能快速得到实验结果，省时省力。

每次包装重组慢病毒，包装质粒和编码包膜蛋白的质粒都是固定不变的，变的是编码目的基因的转移质粒。因此，您需要设计的是转移质粒。登陆www.vectorbuilder.com即可轻松快捷设计转移质粒！

三、腺病毒包装

赛业生物采用第1代重组腺病毒包装系统制备腺病毒颗粒。该包装系统包含一个腺病毒载体和一株包装细胞株。
1、一个腺病毒载体：缺失了E1和E3区域的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上。
2、一株包装细胞株：E1基因片段被整合到293细胞。

野生型腺病毒基因组是一条约36kb的线性双链DNA（dsDNA）分子。基因组的两个末端被称为Inverted Terminal Repeat（ITR），末端之间含有腺病毒DNA复制所需基因。在病毒DNA复制周期早期表达的基因，称为早期基因，主要有4个，按表达先后顺序依次是E1、E2、E3、E4。在病毒DNA复制周期晚期表达的基因，称为晚期基因，主要有5个，按表达先后顺序依次为L1、L2、L3、L4、L5。为了制备出自我失活的重组腺病毒，E1基因会被删除，使重组腺病毒成为一种安全的基因运输工具。为了增加包装能力，E3基因也同时被删除，因为E3基因产物会提高宿主的免疫反应，而且对病毒生产不重要。缺失了E1和E3基因的腺病毒基因组序列被克隆到质粒上构建成腺病毒载体。E1基因片段被整合到293细胞基因组中，包装病毒颗粒时，Pacl消化的腺病毒载体转染到表达E1基因的293细胞。E1基因激活了其他早期基因和晚期基因的表达，这些基因表达产物和Pacl消化的质粒DNA组装成病毒颗粒。

四、腺相关病毒包装

赛业生物采用第2代重组腺相关病毒包装系统制备病毒颗粒。该包装系统包含3个质粒和一株包装细胞株。

1）1个转移质粒：含有两侧有AAVITR序列的转基因表达盒子。

2）1个Rep-cap表达质粒：表达Rep和Cap两个基因。

3）1个辅助质粒：包含来自腺病毒的一些基因（E4、E2a和VA）。这些腺病毒的基因可以促进AAV基因组的复制。

4）1株含有腺病毒E1基因的293细胞。

野生型腺相关病毒基因组是一条长约4.7 kb的线性单链DNA（ssDNA）分子。基因组两末端各有一个145 nt长的Inverted Terminal Repeat (ITR)，ITR序列是对称的，自己能形成发夹结构。病毒感染细胞后，释放出单链病毒基因组，末端发夹结构促使腺相关病毒以单链基因组为模板复制互补链，形成双链DNA。野生型病毒只表达2个基因：rep (replication) 和cap (capsid)，Rep编码非结构蛋白，Cap编码结构蛋白。腺相关病毒基因组不编码polymerase，基因组DNA的复制需要用到宿主细胞表达的polymerase。将基因组上的Rep和Cap基因删除，克隆到质粒上，然后将目的基因克隆在两个ITR之间，这个质粒就成为转移质粒。而Rep和Cap基因被克隆到另外一个质粒上，成为Rep-cap表达质粒。除了Rep-cap表达质粒，还需要一个辅助质粒。这个辅助质粒表达腺病毒的一些基因（E4、E2a和VA），这些腺病毒基因可以促进AAV基因组的复制。除了3个质粒外，腺相关病毒包装系统还需要一株表达腺病毒E1基因的293细胞。

每次包装重组腺相关病毒，辅助质粒均固定不变，只要血清型不变，Rep-cap质粒也是相对固定，变化的是编码目的基因的转移质粒。因此您需重点设计转移质粒，登陆www.vectorbuilder.com即可轻松快捷地设计！

病毒包装信息由赛业（广州）生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于病毒包装报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途