CRISPR/Cas9技术制备基因敲除小鼠(大鼠)

一、技术原理 
        CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）zei新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中，crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activating RNA）结合形成双链RNA，此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑， 目前已经成功应用于大、小鼠基因KO/KI的模型制备。 

二、CRISPR/Cas9 技术特点： 
        1、可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除；
        2、实验周期短，价格低；
        3、可应用于大、小鼠等，无物种限制。

三、制备流程及服务周期： 
  
        备注：可以直接注射DNA

四、CRISPR/Cas9流程图： 
 

五、Cyagen 利用CRISPR/Cas9技术成功构建 Rosa26 KO mice 案例：

野生型：GGCTTCTGAGGACCGCCCTGGGCCTGGGAGAATCCCTTCCCCCTCTTCCCTCG
突变型 1：GGCTTCTGAGGACCGCCCTGGG---------ATCCCTTCCTCCTCTTCCCTCG
突变型 2：GGCTTCTGAGGACCGCCCTGG------AAGAATCCCTTCCTCCTCTTCCCTCG
结果说明：
突变型1: 缺失9bp；
突变型2: 缺失6 bp，替换1 bp。

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公司简介

赛业生物科技集团是全球领先的多元化跨国生物科技实体，2006年成立于美国，中国区总部设立在广州，集团成员包括 Cyagen Bioscience Inc.、赛业（广州）生物科技有限公司、赛业（苏州）生物科技有限公司、赛业健康研究中心（太仓）有限公司等。目 前员工人数达400余名，总规模超22000平方米，业务经营范围涵盖模式动物、细胞生物学、分子生物学、生物信息学、体外诊断等生命科学领域的多个分支 学科。

作为全球领先的转基因/基因敲除模式动物商业技术平台，赛业模式动物中心动物种群规模超过10万只，每年可构建基因敲除鼠模型500例、转基因 鼠模型5000例以上，学术引用累计超过600篇，是目前国际上zei主要、zei被认可的基因工程模式动物商业服务平台之一。自主开发的全球首款功能强大的在线 载体设计工具VectorBuilder，每年可定制载体超30万个，彻底颠覆生物技术领域传统格局，打造载体构建金标准和新模式。

2009年，赛业通过ISO9001:2008认证并于2012年顺利通过复审，确保向广大专家学者提供的所有产品和技术服务符合国际标准。 AAALAC认证的顺利通过，使赛业成为华南地区极少数个获得国际实验动物评估和认可委员会国际认证的单位之一。这不仅是实验动物质量和生物安全水准的象 征，更是国际前沿医学研究的质量标志。

赛业公司目前在美国加州Santa Clara 建立起活体实验鼠检测、隔离中心，成为国内唯一一家具有活体实验鼠类出口能力的生物企业；通过国家出入境检验检疫部门的考核，成为华南地区第一家生物材料 出入境绿色通道试点单位，加速了实验动物出入境审批流程，并进一步提升了赛业模式动物中心国际服务的能力。

目前公司的产品和技术服务已为全球数百个顶尖生命科学实验室和跨国制药公司提供了帮助，秉承着“为生物科技创造无限可能”的企业愿景服务于全世界的科研学者！

专家团队介绍 

欧阳应斌 博士（赛业生物技术副总裁、高级科学家）

 
        欧阳应斌博士，国际知名的分子生物学和模式动物专家，1993年于军事医学科学院博士毕业后，二十多年来一直身居美国致力于分子生物学和基因工程模式 动物研究，先后就任于Indiana大学医学院、Oklahoma医学研究基金会和美国首屈一指的模式动物商业机构Taconic生物科技公司。

        目前任职于跨国生物技术实体Cyagen Biosciences（赛业生物科技），担任技术副总裁和高级科学家，由其率领的科学家团队数年来成功开发了上千种转基因、基因敲除/敲入小鼠及大鼠实 验动物及疾病模型。在PNAS、JBC等高水平杂志发表论文10余篇，由其提供的技术服务被Nature等国际顶尖杂志直接引用达数百次之多。

俞晓峰 博士（赛业生物技术总监、高级科学家） 
 
        俞晓峰博士，国际知名模式动物和细胞生物学专家，1995年军事医学科学院博士毕业，2000年起任耶鲁大学医学院研究员。2003至2009年期间 任职于美国 iTL 基因打靶公司，作为资深科学家和项目经理，负责基因工程小鼠模型研发方案与策略的设计，项目的管理，技术人员的指导与培训等工作。2007年起负责开发了 人源化 p53 基因不同点突变的肿瘤小鼠模型库项目。2009年起任纽约大学医学院研究员。

        2010至2013年期间担任美国 ASC 生物技术公司研发部总监，模型生物服务部总监，以及斯坦福生物公司总裁等职务，目前任职于跨国生物技术实体Cyagen Biosciences（赛业生物科技），担任技术总监和高级科学家。俞博士在遗传工程小鼠领域有超过 15 年的开发和管理经验，在干细胞相关领域和哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次发表在Hum Mol Genet.、Mol Cell Biol.、Mol Cell Biol.、J. Biol. Chem.等高水平杂志上。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途