胶点鉴定

对于较纯或者单一的蛋白样品，我们采用MALDI-TOF蛋白鉴定技术进行蛋白鉴定。除银染的蛋白质胶带样品之外，我们可以对可见的蛋白质胶带进行鉴定。

技术原理

基质辅助激光解吸附质谱技术（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time Of Flight ）的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，从而检测离子。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子，因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。

MALDI-TOF质谱原理示意图

技术流程

技术特点

• 适合较纯的样品，样品简单，容易检测；

• 目标性强，速度快，通量高。

样本要求

• 双向凝胶胶点：考染、银染（质谱兼容）点清晰可见；

• SDS-PAGE胶条：考染、银染（质谱兼容）条带清晰可见，单一蛋白质，纯度>90% ；

• 蛋白质溶液：单一蛋白质，纯度>90%。

技术平台
ABI 4800 MALDI-TOF/TOF

案例解析

高糖通过不同途径干扰胰岛素分泌细胞功能的蛋白质组学研究

慢性高血糖会导致β细胞的功能紊乱并诱导其加速灭亡，是2性糖尿病的一个主要指标。本研究以INS-IE细胞以及其在25mM葡萄糖处理下的两组细胞为研究对象，通过双向电泳（2D）实验寻找到100个显著性差异表达蛋白质。通过MALDI-TOF对这些差异蛋白质点进行鉴定后发现，高糖组是通过伴侣蛋白、蛋白质合成以及遍在蛋白等途径来扰乱细胞的正常生理功能，这些发现通过后续的功能检测试验得到验证。

参考文献

• Bahr U, Deppe A, Karas M, et al. Mass spectrometry of synthetic  polymers by UV-matrix-assisted laser desorption/ionization[J]. Analytical  chemistry, 1992, 64(22): 2866-2869.

• M Maris et al. High Glucose Induces Dysfunction  in Insulin Secretory Cells by Different Pathways: A ProteomicApproach. J.  Proteome Res., 2010, 9 (12),  pp 6274–6287.

• Fenselau C. Peer Reviewed: MALDI MS and Strategies for Protein  Analysis[J]. Analytical chemistry, 1997, 69(21): 661A-665A.

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