siRNA质粒载体构建技术服务

RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术，即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段(19-23bp）外源双链 RNA（double s`tranded RNA)导入细胞中，通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解，从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段，有助于研究该基因在生物模型系统中的作用，是研究基因功能的重要工具，并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。

基本原理示意图

siRNA构建技术服务

本公司提供siRNA 载体的构建服务，siRNA载体可以在细胞内直接转录出 shRNA ，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。

闪晶生物siRNA载体构建服务程序：
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计siRNA靶序列
A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19-21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA靶序列，设计siRNA正义链和反义链，以loop(9nt)相连，称为shRNA（short hairpin RNA）。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板：
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。

收费标准

闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个.

联系电话：021-54460831-11 021-54460832
E-mail: lou800624@163.com  
乘车路线：火车站坐1号地铁到终点,然后换乘5号线到北桥站即可。

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Gensynthese
Gene SynthesisDNA Synthese
Peptide Synthesis 全基因合成  基因合成  密码子优化   多肽合成
细胞培养  细胞转染  细胞稳转  细胞瞬转
免疫印迹   western blot     蛋白质印迹     病毒构建包装
载体构建   蛋白表达    蛋白表达纯化
MGB probe
Protein expression
Polyclonal Antibody

siRNA质粒载体构建信息由上海闪晶分子生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于siRNA质粒载体构建报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途