1 shRNA载体构建

siRNA载体构建：
    RNA 小片段可以通过化学合成或质粒载体转录获得。质粒载体的构建是将长约70bp的含有特定茎环以及终止信号的DNA分子插入到特定载体中，该DNA分子可以在细胞中转录为含有特定发夹结构的RNA双链分子。这些发夹RNA分子在细胞中被切割为19-23nt的双链RNA小片段，从而起到抑制特定基因表达的作用。
与化学合成siRNA相比，siRNA 质粒载体有以下优点：
    1. siRNA载体能够更有效阻遏相应基因的表达。
    2. 更加稳定和易控制。
    3. 可以用于稳定的细胞系建立。
    4. 可以用于诱变系统的建立。
    5. 可以建立基因敲除的小鼠模型。
    6. 含有GFP的载体可以用于监测转染效率。
    7. 可以源源不断的提供siRNA。
    8. 成本低廉。
缺点是：siRNA质粒载体的构建有一定难度，而且需要花费一定的时间。

朗日生物为您提供完善的siRNA质粒载体构建服务. 

9.2 microRNA分析与构建

microRNA简介
        microRNA（miRNA）是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,是发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入，将帮助我们理解高等真核生物的基因榈母有院透丛拥幕?虮泶锏骺赝??
      朗日生物为您提供microRNA载体构建技术服务，您只需提供您要做的目的基因序列及ID号，本公司专业的技术人员为您完成microRNA靶位点序列设计分析、及microRNA载体构建；

microRNA载体构建的特点及优点： 
      1. 超过70%成功阻断：利用BLOCK-It RNAi Designer设计软件，可快速高效地设计、克隆出双链寡核苷酸序列，构建出含Pol II启动子启动的用于RNAi分析的载体，用于RNAi分析，100%保证提供不少于70%的有效阻断（当以50nM转染，而且转染效率至少达80%时，一套中3条RNAi中至少有2条达到至少70%转录的阻断）； 
      2. 简单的表达跟踪：可通过同-顺反子表达Emerald Green Fluorescent Protein(EmGFP)和目的microRNA (miRNA)使得分析简单以及报告因子活性与阻断之间可靠的相关性 
      3. 多靶标阻断：同-顺反子（Co-cistronic）表达使得多个靶标同时阻断并且产生综合表现型。 
      4. 组织特异实验选择：通过选择广泛的目的载体或者Multisite Gateway应用，你可以加入你选择的启动子进行细胞内应用或者体内阻断，在哺乳动物细胞中可进行瞬时或永久的microRNA表达； 

microRNA载体构建技术服务流程：
1.microRNA靶点的预测 
     利用软件得到的目的microRNA的预测靶点。 
2.获得microRNA对应DNA模板
      根据提供的靶序列，合成两条互补的单链DNA模板。或者，设计引物PCR扩增microRNA靶基因3’UTR序列。
3.microRNA靶序列克隆
      将合成的两条单链退火成双链（具有粘性末端），或将PCR产物双酶切，后连入经过同样双酶切的miR-reporter载体中，连接产物转化大肠杆菌。
4.阳性克隆鉴定。
      挑选转化的菌落，PCR筛选含有插入片段的阳性克隆，测序验证克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。 
5.准备质粒，菌株
      抽提验证正确的质粒，定量。准备含有正确质粒的单克隆甘油菌株。 
6.产品包装，发货
      提供有microRNA靶序列的报告质粒，并免费提供阴性对照一份。甘油保存菌株各一支。

RNA干扰技术服务信息由广州朗日生物技术有限公司为您提供，如您想了解更多关于RNA干扰技术服务报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途