发布时间：2022年07月

水稻泛素E3文库双杂筛选

泛素化是一种酶促的、蛋白质翻译后修饰过程，几乎参与了真核生物细胞的所有生命活动，如蛋白酶体依赖的蛋白质降解、细胞周期进程、蛋白定位、转录调控和信号转导等。泛素化过程是由泛素激活酶 (E1)、泛素结合酶 (E2) 和泛素连接酶 (E3) 级联催化完成，最终将泛素分子加到底物蛋白上，从而影响底物蛋白质的稳定性、活性或者细胞定位等。E1、E2和E3的数量存在很大的差异，水稻中有6个E1，49个E2和大约1500个E3。

在整个泛素化级联反应中E3泛素连接酶起决定底物特异性的作用，将泛素分子转移到底物的某个赖氨酸上。通常情况下，泛素连接酶可以将目的蛋白质多泛素化，即加上多个泛素分子，形成多泛素链，从而使带有多泛素链的蛋白质被蛋白酶体所识别和降解。但在一些情况下，泛素连接酶只在目的蛋白质上连接一个泛素分子，这种单泛素化的蛋白质不会被蛋白酶体降解，但其在细胞中的定位或功能却可能发生改变，例如，单泛素化的蛋白质可以通过结合其他具有泛素结合结构域的蛋白质来改变自身位置。根据蛋白亚基结构组成，E3分为两大类，单亚基E3（HECT、RING、U-box）和多亚基E3（SCF (SKP1–CUL1–F-box)、 CUL3–BTB、CUL4–DDB1–DWD、APC/C）。

图  |  泛素化修饰示例图

技术优势

为快速鉴定水稻泛素化蛋白的E3泛素连接酶，建立水稻泛素化互作组，促进水稻科研工作发展，中国农业科学院植保所作物病原生物功能基因组创新团队着手构建水稻泛素E3连接酶文库，欧易生物参与了文库的构建工作。该文库包含了约1500个E3泛素连接酶ORF，占目前已知所有E3连接酶基因总数的98.94%，包含单亚基和多亚基共7种类型。该文库构建于pGADT7载体上，可用于酵母双杂交筛选蛋白底物对应的特异性E3泛素连接酶。

文库参数：

• 文库构建于pGADT7载体上，可用于酵母双杂交筛选蛋白底物对应的特异性泛素连接酶；

• 包含约1500个E3泛素连接酶ORF；

• 占目前已知所有E3连接酶基因总数的98.94%；

• 包含单亚基和多亚基共7种类型，如下表：

表 |  水稻泛素E3连接酶文库组成

基因数据来源：MSU Rice Genome Annotation Project Release 7 data（RGAP 7，http://rice.plantbiology.msu.edu/）

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