甲基化定量检测-MassARRAY技术

DNA甲基化是zei早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物钟的甲基化仅发生于胞嘧***，即在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端胞嘧***转变为5’-甲基胞嘧***。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方式在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。
DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用。

MassARRAY 分子量阵列技术是Sequenom 公司推出的世界上领先的基因分析工具，通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF质谱技术相结合，实现基因分型、DNA甲基化检测。

检测原理

MassARRAY检测过程大体可分为分子生物学反应，质谱阵列的点样和质谱检测三个环节。



Sequenom 检测基于基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption /　ionization－time of flight，MALDI-TOF）原理。质谱仪器主要由两部分组成：基质附助激光解吸电离离子源（MALDI）和飞行时间质量分析器（TOF）。用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离；离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测,即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比。



基于MassARRAY 分子量阵列平台的iPLEX GOLD技术可以设计zei高多达40重PCR反应和基因型检测，实验设计非常灵活，分型结果准确性高。根据应用需要，对于数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时，MassARRAY具有zei佳性价比。特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证，或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。
Sequenom 公司DNA甲基化分析采用MassARRAY EpiTYPER流程，该过程结合碱基特异性酶切(分子切割)和MALDI-TOF检测原理，可实现多重CpG的分析检测，同时具有DNA甲基化定量分析能力。Sequenom DNA甲基化检测由亚硫酸盐处理待测DNA开始，经过亚硫酸盐处理，DNA中未甲基化胞嘧***(C)转变为尿嘧***(U)，而甲基化修饰的胞嘧***不受影响，因此亚硫酸盐处理将产生甲基化特异的序列变化。通过PCR扩增过程引入T7-启动子序列，经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物，再经过碱基特异性酶切处理，得到RNA小片段，并用飞行质谱检测每个片段的分子量，zei后EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。

平台设备

　　　　　　　　

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途