基因表达分析 

甲基化PCR

简介：
    DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高度甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生。目前, 基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）和硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR, BSP）。

技术原理：

1、MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧***发生脱氨基变为尿嘧***，而甲基化的胞嘧***无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列差异，设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物，结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开。这种方法灵敏度高，对DNA的质和量需要少。

2、BSP：甲基化的胞嘧***在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变，用一对特异性引物扩增后测序，再与DNA原始序列比对确定甲基化位点。测序法克服了只能针对单个位点检测，并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点，可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测。

服务流程：
1、根据目的基因启动子序列设计相应引物；             
2、基因组DNA的提取和定量；
3、亚硫酸氢钠修饰基因组DNA；                              
4、修饰后DNA纯化回收；
5、 a.结合实时定量PCR的qMSP；      
b.BSP，对PCR产物进行测序并与未经处理的序列比较；
6、数据处理；
7、向客户提交数据分析结果与实验报告。
 

客户提供：
尽可能新鲜和足量的组织（≥50mg）、细胞样品（≥106）或全血（≥300μl），或直接提供纯化好的DNA（≥5μg/样品）。
我司提供：原始数据及实验结果和方法报告单。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途