MTT（四唑蓝）比色法是是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT法广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验等研究。

实验方法：

        1. 收集对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入50μl铺板使待测细胞调密度 5000- 7500细胞/ 孔。

        2.  5%CO2，37℃孵育过夜，倒去培养液，加入浓度梯度的药物。每个药物设9个浓度梯度（30μmol/L,10μmol/L,3.33μmol/L,1.11μmol/L,0.37μmol/L,0.123μmol/L, 0.041μmol/L, 0.0137μmol/L, 0μmol/L），每孔50μl，每个浓度设2个重复，同时设DMSO和阳性药物（Taxol/Gemcitabine）对照组。

       3.  5%CO₂，37℃孵育72小时。

       4. 倒掉含药培养基，每孔加入100μl 用无血清培养基配制的终浓度1mg/ml MTT 溶液，继续培养4h。

       5.  每孔加入溶解液25%SDS (Sodium Dodecyl Sulfate十二烷基硫酸钠)+50%DMF 100μl，37℃孵育过夜。

       6. 用synergy 4多功能读板机于OD570nm读取各孔的吸光值。

统计学分析

         1．分析软件     Excel，GraphPad Prism 5

        2.  数据分析    

 （1）计数资料以均值±标准差表示，结果采用单因素方差分析（ANOVA）。

      （2）各种样品的IC50曲线用GraphPad Prism 5软件进行分析生成。

            样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比为：

  （样品孔OD值-空白孔OD均值）/（阴性对照孔OD值-空白孔OD均值）*100%

  （3）样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比进行非线性回归分析，按以下方程进行拟合，得到样品的浓度-效应依赖性曲线。

Y = 1/(1 + 10(log IC50 − X) × HillSlope)

                    其中IC 50为抑制肿瘤生长50%的样品浓度。

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