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病理形态学

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一.HE特殊染色

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中zei基本、使用zei广泛的技术方法。

染色分类

易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。

常规HE染色步骤

试剂配置

A:0.5~1% 的伊红酒精溶液:

称取伊红Y 0.5~1 g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。

B:苏木素染液配方:(配制3000 ml,可按比列减少)

苏木精 6 g

无水乙醇 100 ml

硫酸铝钾 150 g

蒸馏水 2000 ml

***酸钠 1.2 g

冰醋酸 120 ml

甘油 900 ml

配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,zei后加入冰醋酸和***酸钠。

C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

二.

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

基本原理

抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。

三.TUNEL细胞凋亡

细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

项   目                实验结果                                标本要求
石蜡包埋 ,             蜡块                                  固定后的组织
HE染色            染色后的玻片(可拍照)                     蜡块、切片、组织
番红-固绿染色     染色后的玻片(可拍照)                      蜡块、切片、组织
防脱切片          切好后的玻片                               公司提供防脱玻片
冰冻切片          切好后的玻片                               公司提供防脱玻片
Masson染色       染色后的玻片(可拍照)  
PAS染色          染色后的玻片(可拍照)  
免疫组化 (IHC)   染色后的玻片(可拍照)                       客户仅需提供一抗
免疫荧光 (IF)        拍好的图片                        客户需提供一抗,确定拍照部位。
电镜                 图片                                   固定后的标本
Tunel检测            片子                                    荧光可以拍照
组织脱钙            针对骨组织  
拍照               拍好的图片                               确定部位,Nikon显微镜。
组化分析           典型图片,数字结果。                      IPP6.0软件。
其它染色            包括甲***胺蓝,尼氏,油红O、

四。组织芯片

组织芯片(tissue chip),也称组织微阵列(tissue microarrays),是生物芯片技术的一个重要分支,是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上,进行同一指标的原位组织学研究。该技术自1998年问世以来,以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。

组织芯片与基因芯片和蛋白质芯片一起构成了生物芯片系列,使人类第一次能够有效利用成百上千份组织标本,在基因组、转录组和蛋白质组三个水平上进行研究,被誉为医学、生物学领域的一次革命。组织芯片技术可以与其他很多常规技术如免疫组织化学(IHC)、核酸原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、原位PCR等结合应用,它的应用领域正在不断地拓展。作为一项新兴的生物学研究技术,正以它绝对的优越性展示着自己的潜力。

微阵列上所有单元均为平行在位检测每一样本中DNA、RNA和蛋白质目标提供了靶。同时前后关联的单元可以迅速分析样本部分的几百个分子标记,以及构建未培养的人类肿瘤的相关遗传细胞型或表现型特征数据库。

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