使用ACQUITY QDa质谱检测器对单克隆抗体亚基进行工艺监测以快速监测关键品质属性

简介 

蛋白类治疗药物是一类快速发展的药物。由于它们的生产工艺复杂，在开发 和生产过程中，我们需要通过各种检测手段来监测其关键品质属性(CQA)， 以确保产品质量和安全性。蛋白质糖基化修饰已成为一项重要的品质属性， 因为研究表明半乳糖基化修饰与某些市售重组单克隆抗体(mAb)的细胞毒性有 关1 。相关分析方法包括基于荧光和MS技术的释放-标记技术，以及分别用于 监测单个游离寡糖或糖蛋白的“自下而上”方法。此外，还可采用“自中而 下”策略来评估mAb亚基的主要糖型。后一种方法在生产环境中尤其有用， 在这种环境下，该方法能够以经济有效的方式及时报告糖基化分布的变化并 进行纠正。 

ACQUITY QDa质谱检测器是一款经济有效的工具，可用作正交检测技术，为 现有LC工作流程增加获取质谱数据的功能。本研究旨在评估将ACQUITY QDa 质谱检测器应用于亚基分析的适用性。曲妥珠单抗是一种IgG1抗体，可以被 二硫苏糖醇(DTT)还原为大约25 kDa的轻链和大约50 kDa的重链肽段(图1A)。 采用MassLynx软件进行数据采集，能够通过MaxEnt1去卷积算法解析复杂的 谱图，以便测定各个亚基的分子量。IdeS酶解和还原可产生三种肽段，每种 肽段约25 kDa(图1B)。由于IdeS酶解会使得抗体铰链区的单个位点处发生专 属性的高效裂解，因此它成为了治疗性mAb的常用表征工具之一，而在本例 中，我们将其作为监测主要糖型的一种替代方法。