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MALDI-TOF/TOF蛋白质鉴定
技术原理
MALDI-TOF/TOF，即基质辅助激光解析电离飞行时间质谱，是将样品均匀包埋在基质中，基质吸收激光提供的能量而蒸发，携带样品分子进入气相，并将一部分能量传递给样品分子使其离子化。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，从而检测离子。适用于二维电泳或DIGE胶点样本或者较纯的蛋白样品的鉴定。
样本要求
样本类型 | 样本要求 |
双向凝胶电泳点 | 考染、银染（质谱兼容）点清晰可见
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SDS-PAGE条带 | 单一蛋白质，纯度>90%，考染、银染（质谱兼容）清晰可见
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蛋白质溶液 | 单一蛋白质，纯度>90%，蛋白质总量>5μg，浓度>0.1μg/μl；
缓冲液不含去污剂NP40、Triton X-100等
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检测仪器
4800 Plus MALDI TOF/TOF™（ABI）
二、HPLC-MS/MS蛋白质鉴定
技术原理
HPLC-MS/MS，又叫高效液相色谱-质谱联用技术，通过液相色谱分离，串联质谱检测，zei后用相应的数据库进行检索匹配。适用于二维电泳胶点、SDS-PAGE胶条、IP/Co-IP/pull-down产物以及shotgun混合蛋白质样品的蛋白鉴定。
样本要求
样本类型 | 样本要求 |
双向凝胶电泳点 | 考染、银染（质谱兼容）点清晰可见 |
SDS-PAGE条带 | 考染、银染（质谱兼容）条带清晰可见 |
蛋白质溶液 | 蛋白质总量>5μg，浓度>0.1μg/μl；缓冲液不含去污剂NP40、Triton X-100等 缓冲液不含去污剂NP40、Triton X-100等 |
检测仪器
Thermo Scientific LTQ
Thermo Scientific Q Exactive
实验流
代表性文献
1. Wang X, et al. A comprehensive differential proteomic study of nitrate deprivation in Arabidopsis reveals complex regulatory networks of plant nitrogen responses. J Proteome Res, 2012; 11(4): 2301-2315.
2. Tamura K, et al. Identification and characterization of nuclear pore complex components in Arabidopsis thaliana. Plant Cell, 2010; 22(12): 4084-4097.
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