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本实验可检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是不同标记(荧光或者生物素)的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT
Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3‘-OH末端,再通过荧光激发或者化学显色的方法,特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在显微镜下即可观察和计数凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。本实验适用于组织和细胞样本的凋亡原位检测。
操作步骤
一、样品处理
1. 细胞样品:自然晾干的细胞样品固定;封闭;通透液促渗
2. 冰冻样本:PBS浸润;封闭;通透液促渗
3. 石蜡样品:脱蜡及水化;微波或蛋白酶K修复;封闭
二、标记反应
1. 荧光标记:滴加TdT酶反应液,反应;荧光显微镜检测
2. 生物素标记:滴加TdT酶工作液反应;滴加Streptavidin-HRP工作液反应; DAB显色;苏木素复染;显微镜观察拍照。
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我们的结果
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