MTT或CCK8药物体外细胞毒性检测

原理

        MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。

      MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒 (Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

MTT主要有两个用途：

1、药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；

2、细胞增殖及细胞活性测定。

一般实验方法

贴壁细胞：

1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度1000-10000 孔，(边缘孔用无菌PBS填充)。

2、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药。一般5-7个梯度，每孔100ul，设3-5个复孔。建议设5个，否则难以反映真实情况。

3、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4、每孔加入20ul MTT溶液(5mg/ml，即0.5%MTT)，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5、终止培养，小心吸去孔内培养液。

6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。
 

客户须知

客户需提供：足量样品、样品信息（如细胞类型、分子量、溶解性、稳定性、保存条件等）、相关实验设计内容（如样品作用时间、浓度等）、细胞株等。武汉市内可上门取样，外地需邮寄样本请提前咨询。
 

终产品

实验结果、IC50值及完整的实验报告。

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途