核酸提取与纯化技术

细胞、动物组织、植物样本和血液RNA提取

转染级质粒大规模制备

基因组提取

培养细胞总RNA提取

定义

       在生物体内发现主要有四种不同的RNA分子在基因的表达过程中起重要的作用。它们是信使RNA（messengerRNA，mRNA）、转移RNA（transferRNA，tRNA）、核糖体RNA（ribosomalRNA，rRNA）、微小RNA（microRNA，miRNA）。

实验步骤

1、提取培养细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10×106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打振荡以裂解细胞；

2、将培养细胞的Trizol裂解液转入EP管中，室温放置5分钟；

3、在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，用力震荡15秒，室温放置2～3分钟后，12000g 4℃离心15分钟；

4、取上层水相置于新EP管，按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，室温放置10分钟,12000g4℃离心10分钟；

5、弃上清，按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g4℃离心5分钟，弃上清；

6、RNA沉淀于室温自然干燥；

7、用Rnase-free water 溶解RNA沉淀，然后电泳检测

服务内容

从培养细胞中提取总RNA，通过电泳及OD值测定检测RNA纯度

终产品

1、客户需求的RNA提取样本

2、完整实验报告，电泳照片， OD值

服务说明

1、细菌、细胞样品需新鲜培养，动物组织、植物组织等样品取样后需液氮或-80℃速冻

2、用于提取基因组RNA的血液样品在4℃下可保存一周，-20℃下可保存1个月

3、服务开始前，请与我们及时沟通，以安排科学地取样，实验样品最好使用干冰运输（杭州地区可以上门取样）

转染级质粒大规模制备

定义

       常规方法提取的质粒由于浓度低且内毒素含量较高，不能直接用于细胞转染实验。利用高品质质粒抽提试剂可为您提供转染级别的大提质粒，可直接用于细胞转染实验。

实验步骤

1、挑取琼脂培养皿上的单个菌落，移至3-10mlLB培养液中，37℃150rpm培养过夜。   

2、取1.5ml培养液移至Eppendorf管内，12000rpm离心1分钟，弃上清液。

3、将细菌沉淀悬浮于100μl溶液（GTE溶液）中，强烈振荡使之充分混匀。

4、加入200μl新鲜配置的溶液（NaOH/SDS溶液），盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合内容物，置冰上5-10分钟。

5、加入150μl溶液（5mol/L乙酸钠，pH5.2），轻轻颠倒数次，使溶液充分混匀，冰上放置3-5分钟。

6、10000rpm,4℃下离心10分钟，将上清液转移至另一离心管中。

7、加等体积的酚:氯仿，振荡混匀，10000rpm,4℃离心2min，将上清转移至另一离心管中。

8、加两倍体积无水乙醇沉淀双链DNA，充分混匀，室内放置2分钟

9、10000rpm,4℃下离心10分钟。

10、弃上清液，加1ml70％乙醇洗涤沉淀双链DNA，10000rmp，4℃下离心5分钟，倒尽乙醇，吸干管口残留乙醇。

样品要求

客户请提供≥100ng的质粒样品或含有目的质粒的菌种，以满足琼脂糖凝胶电泳检测及转化需要。

服务说明

1、如果您提供的质粒拷贝数低(1ml培养提取量<1μg)，实验费用需要额外增加。

2、我们提供氨苄青霉素、卡那霉素和氯霉素抗生素；使用其它抗生素时，需要您提供抗生素及抗生素的工作浓度。

3、如果需要进行质粒鉴定(如酶切鉴定、PCR鉴定或测序鉴定等)，请提供鉴定的方法，费用额外收取。客户寄来的质粒经鉴定为非目的质粒时，将收取鉴定发生的费用。

终产品

质粒 (1.7≤OD260/OD280≤2.0)、保存菌种；

完整实验报告：电泳照片，OD值测定结果。

基因组提取

原理

        制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有：1、物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法；2、化学方式：异硫qing酸胍法,碱裂解法；3、生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

服务内容

       从动、植物组织，血液，细菌，细胞等多种材料中提取基因组DNA，并通过检测OD值和琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA质量。

终产品

1、提供可用于普通PCR，酶切等相关试验的基因组DNA

2、提供电泳图及试验报告。

 

核酸提取与纯化技术信息由上海格索普生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于核酸提取与纯化技术报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途