免疫组化

免疫组化（IHC）

定义

      免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。

一般实验步骤

1、脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯I-二甲苯II-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯，依据的是相似相溶的原理。一般在每个试剂中放10min，天气热可以少放几分钟，相反，天气较冷的话，就要适当延长脱蜡时间，一般为12-15min。

2、抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。

3、血清封闭：冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭液）。

4、加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。

5、加二抗：将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。

6、加SABC：将片子从温箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC，然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。

7、加显色剂：将片子从温箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀）A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲液

8、复染：将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木.精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。

9、脱水：将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。

10、封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。

服务内容

1、 常规免疫组织化学染色。

2、实验结果显微照相（根据需要可附图片）。

样品要求

1、客户需提供石蜡切片及一抗。

2、用于石蜡包埋的组织，活检或手术切除标本应在2小时内取材或固定，避免组织自溶及抗原变性等影响免疫组化结果。用于冰冻切片的组织，取材后应立即放如液氮冷冻，然后放入-80℃保存。

终产品

1、切片显微图片一张，如需另外拍片，按10元/张计，如需分析，费用请致电咨询。

2、染色后的切片；

3、完整实验报告。
 

服务说明

1、采用免疫组化试剂盒进行检测，DAB显色。

2、预实验与正式试验均按照切片张数进行收费。

免疫组化信息由上海格索普生物科技有限公司为您提供，如您想了解更多关于免疫组化报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途