数字PCR技术服务

技术原理：
数字PCR( 也可称单分子PCR)包括两部分内容：PCR 扩增和荧光信号分析。在PCR扩增阶段，与传统技术不同，数字PCR需要将样品稀释到单分子水平，并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR对每个循环进行实时荧光测定的方法，数字PCR技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。数字PCR的定量方法不依赖于扩增曲线的循环阈值，因此不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线，具有很好的准确度和重现性，可以实现绝对定量分析。在未来十年内，医学保健的目标是提供优质高效的个性化医疗。PCR方法会在实现这个目标的过程中发挥重要作用。相比于传统的PCR，数字PCR 技术有着无可比拟的优势和广泛的应用前景。
 
         

数字PCR检测原理

数字PCR检测流程

 
应用领域：
 

突变/稀有变异检测（Mutation/Rare variant detection）

拷贝数变异（Copy-number variation）

进入外周循环（包括血液和粪便）的肿瘤组织核酸分析

无创产前筛查：

转化移植检测。

药理学（Pharmacogenetics）

基因表达分析（Gene expression analysis）-特别针对单细胞或少量细胞或者血清血浆样品

线粒体拷贝数分析与线粒体突变分析

数字PCR可以验证二代测序(NGS)

 
应用案例：
 
 

Huggett JF, Foy CA, Benes V et al.(2013) The digital MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative digital PCR experiments. Clinical Chem 6:892–902.

Absolute quantification by droplet digital PCRversus analog real-time PCR Christopher M Hindson et al. nature methods | VOL.10 NO.10 | OCTOBER 2013

Detection of Cancer DNA in Plasma of Early Stage Breast Cancer Patients Julia A. Beaver*1, Danijela Jelovac February 19, 2014 American Association for Cancer Research

Evaluation of a Droplet Digital Polymerase Chain Reaction Format for DNA Copy Number Quantification Leonardo B. Pinheiro, Victoria A. Coleman,November 28, 2011 American Chemical

Qin J, Jones R C, Ramakrishnan R. Studying copy number variations using a nanofluidic platform. Nucleic Acids Res, 2008,36(18): e116

Lo Y M D, Fiona M F, Chan K C A, et al. Digital PCR for the molecular detection of fetal chromosomal aneuploidy. Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(32): 13116-13121

Warren L, David B, Irving L W, et al. Transcription factor profiling in individual hematopoietic progenitors by digital RT-PCR. Proc Natl Acad Sci USA, 2006, 103(47): 17807-17812

Ottesen E A, Jong W H, Stephen R Q, et al. Microfluidic digital PCR enables multigene analysis of individual environmental bacteria. Science, 2006, 314(5804): 1464-1467

Tadmor A D, Elizabeth A O, Jared R L, et al. Probing individual environmental bacteria for viruses by using microfluidic digital PCR. Science, 2011, 333(6038): 58-62

Tian Wang, Hongying Sha. , et al. Polar Body Genome Transfer for Preventing the Transmission of Inherited Mitochondrial Diseases。Cell 157, 1591–1604, June 19, 2014

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