“彗星”实验服务

                       原理：
“彗星”实验又称单细胞凝胶电泳实验，是一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单、双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到电解液中，而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。在中性条件下，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来。在电泳过程中，这些DNA断链及片段带会离开核DNA 向正极迁移形成“彗星”状图像，而未受损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越大，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性，研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。
客户提供：
1. 研究用细胞或组织；
2. 检测的指标；
3. 请客户提供DNA受损详细相关信息或相关文献。
单细胞凝胶电泳实验流程：
1.细胞接种：单细胞凝胶电泳实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行单细胞凝胶电泳实验当天细胞密度应达到60%～80%覆盖；
2. DNA损伤处理；
3. 收集细胞，制备单细胞悬液；
4. 制备胶板；
5. 细胞裂解与电泳；
6. 中和与染色；
6. 荧光显微镜拍照，记录实验结果。        
最终结果：
1. 阴性对照结果；
2. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；
3. 原始实验图片及数据。 


相关要求（客户提供）：
1.生长状况良好的细胞株，细胞特性，培养条件及相关注意事项；公司可负责代购；
2.诱导细胞DNA损伤所需试剂、条件等相关背景资料；
 
交付结果：
1. 具体实验报告（包括实验步骤和主要仪器及试剂说明）；
2. 实验组和对照组单细胞凝胶电泳图。
 

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