凝胶迁移实验

                       EMSA凝胶迁移实验
原理：
       EMSA是检测蛋白与DNA形成复合体并直接相互作用的技术方法，可用于定性和定量分析，能够更准确的判断蛋白与DNA的特异性结合序列，因此蛋白-DNA复合体的识别在研究基因的表达调控中具有重要作用。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素或生物素标记的DNA或RNA探针共孵育，在非变性聚丙酰胺烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异)，和其它非相关的片段(非特异)，来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

实验流程：
1. 样本数(泳道)设定及浓度梯度实验设计；
2. 3'生物素探针设计及合成；
3. EMSA电泳凝胶配置；
4. 电泳分离复合物和非结合的探针；
5. 紫外交联；
6. EMSA反应物电泳检测；
7. 实验分析及报告。

相关要求(客户提供)：
1. 细胞核蛋白提取物或纯化的转录因子，部分实验亦可使用重组表达的蛋白，每张膜至少提供50uL，浓度>0.5mg/ml；
2. 探针序列，如需设计，请客户提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献。
 
最终结果：
1. 实验合成生物素标记探针；
2. 非标记探针（竞争性EMSA）；
3. 剩余目的蛋白和抗体；
4. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；
5. 原始实验图片及数据。

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